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yghboy168

银虫 (小有名气)

[求助] 比较CT值法实时定量扩增效率可直接用反转录的cDNA稀释做模板吗？ 已有1人参与

比较CT值法实时定量，检测目的基因和内参扩增效率，可以直接用反转录的cDNA稀释做模板吗？还是必须把目的基因和内参构建质粒，测浓度，稀释做模板？
还有扩增效率在什么范围内可以接受？谢谢！
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眼内有尘三界窄，心头无事一床宽！
1楼 2016-12-26 11:47:39
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yghboy168

银虫 (小有名气)
自己顶一下，还有有没有这方面的参考文献？
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眼内有尘三界窄，心头无事一床宽！
2楼2016-12-26 11:48:38
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yghboy168: 金币+10, ★★★很有帮助 2016-12-27 09:27:40
相对定量引物的扩增效率，一般情况是不需要构建质粒的。只有在特殊的情况，比如说你的引物特异不好容易扩增到其他的序列上，为了更严格的实验就会把基因用普通pcr扩增然后测序比对一下，但是是不需要构建载体的。只有绝对定量需要构建质粒作为标准品。扩增效率一般要在95%-105%之间这个算是不错的，这个扩增效率做实验是没有问题的。
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3楼2016-12-26 11:53:40
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Liumengya

木虫 (正式写手)
cdna和子粒构建两种方法都行，

发自小木虫Android客户端
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4楼2016-12-26 12:17:34
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yghboy168

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-26 11:53:40
相对定量引物的扩增效率，一般情况是不需要构建质粒的。只有在特殊的情况，比如说你的引物特异不好容易扩增到其他的序列上，为了更严格的实验就会把基因用普通pcr扩增然后测序比对一下，但是是不需要构建载体的。只 ...

那一般审稿人对用cDNA稀释的测扩增效率认可吗？你们一般是用什么稀释测扩增效率的？基因组，或者目的基因的PCR产物稀释做模板可以吗
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5楼2016-12-27 09:25:23
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yghboy168

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Liumengya at 2016-12-26 12:17:34
cdna和子粒构建两种方法都行，

有没有相应的用cDNA稀释做模板的文献？
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6楼2016-12-27 09:26:17
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yghboy168

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-26 11:53:40
相对定量引物的扩增效率，一般情况是不需要构建质粒的。只有在特殊的情况，比如说你的引物特异不好容易扩增到其他的序列上，为了更严格的实验就会把基因用普通pcr扩增然后测序比对一下，但是是不需要构建载体的。只 ...

那有没有用cDNA稀释做模板的文献？
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7楼2016-12-27 09:28:25
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