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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 酶切验证
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Rdan

新虫 (小有名气)

[求助] 酶切验证 已有4人参与

各位前辈，做酶切验证2月有余，一直切不开苦于不知道什么原因，特来求助。如图是，最新一次华大合成嗯引物，泳道5是marker.6是ApaI单酶切条带，7是KpnI单酶切条带，8是APAI和KPNI双酶切的条带。目的基因大小应为3301，T载体是2692。加起来质粒应为6000左右。三次合成带酶切位点的引物pcr都能扩增出条带，但是提取的质粒大小也对，唯独切不开。请各位前辈帮忙分析一下是否是酶切位点的设计有问题，还是合成过程突变或者甲基化了。另外，酶切体系是：10*buffer 2ul, apaI1ul,kpnI1ul ,质粒5 ul,ddh2
o 11ul.37°，2h

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1楼 2016-12-24 21:15:15
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Rdan

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2016-12-25 09:35:05
图呢？

谢谢，这是图！
酶切验证



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4楼2016-12-25 13:12:41
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主
图呢？

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知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
2楼2016-12-25 09:35:05
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mlxmiao

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先测序验证一下，说不定真变了

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3楼2016-12-25 10:18:55
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-26 07:42:37
引用回帖:
4楼: Originally posted by Rdan at 2016-12-25 13:12:41
谢谢，这是图！

...

质粒做pcr了吗？如果质粒pcr扩出来，酶切时间可以相应的增长些，过夜切。或者再找酶切位点，换一个酶进行单酶切。以前碰到过这种情况，刚开始没有切开，后来过夜切就切开了，测序也对。

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知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
5楼2016-12-25 13:18:19
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