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酶切验证 已有4人参与
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各位前辈，做酶切验证2月有余，一直切不开苦于不知道什么原因，特来求助。如图是，最新一次华大合成嗯引物，泳道5是marker.6是ApaI单酶切条带，7是KpnI单酶切条带，8是APAI和KPNI双酶切的条带。目的基因大小应为3301，T载体是2692。加起来质粒应为6000左右。三次合成带酶切位点的引物pcr都能扩增出条带，但是提取的质粒大小也对，唯独切不开。请各位前辈帮忙分析一下是否是酶切位点的设计有问题，还是合成过程突变或者甲基化了。另外，酶切体系是：10*buffer 2ul, apaI1ul,kpnI1ul ,质粒5 ul,ddh2 o 11ul.37°，2h 发自小木虫Android客户端 |
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mlxmiao
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3楼2016-12-25 10:18:55
sky蒲公英
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2楼2016-12-25 09:35:05
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-26 07:42:37
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质粒做pcr了吗？如果质粒pcr扩出来，酶切时间可以相应的增长些，过夜切。或者再找酶切位点，换一个酶进行单酶切。以前碰到过这种情况，刚开始没有切开，后来过夜切就切开了，测序也对。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-12-25 13:18:19