24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

斑点windy

铁虫 (著名写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 3788
散金: 76
红花: 9
沙发: 7
帖子: 1542
在线: 102.8小时
虫号: 4088652
注册: 2015-09-21
专业: 分子与进化生态学

[交流] 谁会，想请教

最近做pcr扩增，之前用一家公司的酶扩出来了，因为东西没了，就换了takara的，可是，怎么也扩不出来，就算扩出，条带特别浅，该怎么办［大哭］

发自小木虫IOS客户端

回复此楼

» 猜你喜欢

1楼 2016-12-22 14:26:42

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

peitaokong

银虫 (小有名气)

应助: 70 (初中生)
金币: 619.5
散金: 12
红花: 13
帖子: 192
在线: 55小时
虫号: 1961265
注册: 2012-08-29
性别: GG
专业: 植物生理与生化

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
斑点windy: 金币+5 2016-12-22 23:12:43

引用回帖:

16楼: Originally posted by 斑点windy at 2016-12-22 17:39:21
嗯，我懂你的意思了，这也是加大产量的方法，但是，我现在只是摸索条件，就是设置了温度梯度，如果现在用两步法，我还有大量的样，那些该怎么办呢？万一有的样一点没有条带，怎么办呢？
...

如果是扩增不出来的，那就要优化条件了。可以通过几个方面来调整，一个是镁离子的浓度。对于GC含量高的基因序列，可以选择加入GC buffer，当然退火温度也是需要考虑的。最后有条件的可以考虑换好一点儿酶，一般进口的酶，效果肯定要比国产的好些，无论是扩增效率，还是扩增的能力都要好些，当然价格肯定要比国产的贵一些。序列太长的可以考虑高保真酶。希望能够对你有所帮助。