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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 谁会，想请教
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斑点windy

铁虫 (著名写手)

[交流] 谁会，想请教

最近做pcr扩增，之前用一家公司的酶扩出来了，因为东西没了，就换了takara的，可是，怎么也扩不出来，就算扩出，条带特别浅，该怎么办［大哭］

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1楼 2016-12-22 14:26:42
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peitaokong

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
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斑点windy: 金币+5 2016-12-22 23:12:43
引用回帖:
16楼: Originally posted by 斑点windy at 2016-12-22 17:39:21
嗯，我懂你的意思了，这也是加大产量的方法，但是，我现在只是摸索条件，就是设置了温度梯度，如果现在用两步法，我还有大量的样，那些该怎么办呢？万一有的样一点没有条带，怎么办呢？
...

如果是扩增不出来的，那就要优化条件了。可以通过几个方面来调整，一个是镁离子的浓度。对于GC含量高的基因序列，可以选择加入GC buffer，当然退火温度也是需要考虑的。最后有条件的可以考虑换好一点儿酶，一般进口的酶，效果肯定要比国产的好些，无论是扩增效率，还是扩增的能力都要好些，当然价格肯定要比国产的贵一些。序列太长的可以考虑高保真酶。希望能够对你有所帮助。
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20楼2016-12-22 19:07:38
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baichi121234

禁虫 (职业作家)
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2楼2016-12-22 14:33:18
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斑点windy

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by baichi121234 at 2016-12-22 14:33:18
该延期了

但愿不要，太痛苦

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3楼2016-12-22 14:35:46
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peitaokong

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
斑点windy: 金币+1 2016-12-22 15:58:22
我只想说takara的酶是真的不太好用，谁用谁知道。你可以尝试下两步法扩增，或者干脆换支好点儿的酶，来扩一下。
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4楼2016-12-22 14:49:32
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