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斑点windy

铁虫 (著名写手)

[交流] 谁会,想请教

最近做pcr扩增,之前用一家公司的酶扩出来了,因为东西没了,就换了takara的,可是,怎么也扩不出来,就算扩出,条带特别浅,该怎么办[大哭]

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peitaokong

银虫 (小有名气)

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斑点windy: 金币+5 2016-12-22 23:12:43
引用回帖:
16楼: Originally posted by 斑点windy at 2016-12-22 17:39:21
嗯,我懂你的意思了,这也是加大产量的方法,但是,我现在只是摸索条件,就是设置了温度梯度,如果现在用两步法,我还有大量的样,那些该怎么办呢?万一有的样一点没有条带,怎么办呢?
...

如果是扩增不出来的,那就要优化条件了。可以通过几个方面来调整,一个是镁离子的浓度。对于GC含量高的基因序列,可以选择加入GC buffer,当然退火温度也是需要考虑的。最后有条件的可以考虑换好一点儿酶,一般进口的酶,效果肯定要比国产的好些,无论是扩增效率,还是扩增的能力都要好些,当然价格肯定要比国产的贵一些。序列太长的可以考虑高保真酶。希望能够对你有所帮助。
20楼2016-12-22 19:07:38
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baichi121234

禁虫 (职业作家)

本帖内容被屏蔽

2楼2016-12-22 14:33:18
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斑点windy

铁虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by baichi121234 at 2016-12-22 14:33:18
该延期了

但愿不要,太痛苦

发自小木虫IOS客户端
3楼2016-12-22 14:35:46
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peitaokong

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
斑点windy: 金币+1 2016-12-22 15:58:22
我只想说takara的酶是真的不太好用,谁用谁知道。你可以尝试下两步法扩增,或者干脆换支好点儿的酶,来扩一下。
4楼2016-12-22 14:49:32
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