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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 重组蛋白挂不上柱子，能否通过改变诱导条件来改变其折叠情况?
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海

[交流] 重组蛋白挂不上柱子，能否通过改变诱导条件来改变其折叠情况?

我的重组蛋白镍柱纯化挂不上柱子，应该是hiS标签被包埋了，然后我就把重组蛋白用含8M尿素的溶解液将蛋白质重新溶解，上柱子纯化，这次在高浓度咪唑出出现了目的蛋白。这样的得到的目的蛋白算是包涵体还是正常蛋白呢？毕竟我看到有人说尿素溶解会使蛋白质变性。
另外，能不能通过改变诱导条件来改变表达蛋白的折叠情况来使HiS标签外露呢？一般都选择哪些条件来改变？谢谢了！
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1楼 2016-12-17 21:16:16
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-18 00:41:06
低温低诱导剂一般转速

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2楼2016-12-17 23:12:33
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)
★ ★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-18 00:41:17
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-18 00:41:28
引用回帖:
2楼: Originally posted by Bioexperixgs at 2016-12-17 23:12:33
低温低诱导剂一般转速

我用16度0.6mM iptg 200rpm摇。

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3楼2016-12-17 23:13:41
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-18 00:41:39
收集蛋白滤液检测一下看看有没有挂住，如果这一步挂上去了，那就是洗的时候洗掉了

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4楼2016-12-17 23:15:09
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闲来小译

金虫 (正式写手)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-20 22:06:44
基本不可能。标签外露跟诱导没有关系。标签也不一定要带在两端，如果可以预测到蛋白里面的loop结构，也可以插在loop里面。实在不行推荐用his-sumo，绝对能暴露his标签
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5楼2016-12-18 04:04:40
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)
★
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如果上镍柱还是带8M尿素，那就还是变性蛋白，可以进行复性，然后过离子柱

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I am not a hero , but I served with heroes！
6楼2016-12-18 09:54:13
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mataomatao

禁虫 (正式写手)
★
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本帖内容被屏蔽
7楼2016-12-18 09:54:56
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sss2172014

木虫 (小有名气)
★
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首先考虑换tag，最终换boundary，和折叠有关，和诱导没太大毛关系。gst，gb1，trx，mbp上啊

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8楼2016-12-18 10:26:43
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海
引用回帖:
4楼: Originally posted by Bioexperixgs at 2016-12-17 23:15:09
收集蛋白滤液检测一下看看有没有挂住，如果这一步挂上去了，那就是洗的时候洗掉了

穿透液有很多目的蛋白

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9楼2016-12-20 14:16:47
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海
引用回帖:
7楼: Originally posted by mataomatao at 2016-12-18 09:54:56
离心蛋白在上清还是沉淀

上清

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10楼2016-12-20 14:17:08
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