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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 百金求助！ATP aptamer 5’FAM标记后被互补链BHQ淬灭。加入ATP后，恢复不明显！！
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ly881515

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] 百金求助！ATP aptamer 5’FAM标记后被互补链BHQ淬灭。加入ATP后，恢复不明显！！ 已有4人参与

实验过程是这样的，把FAM标记的aptamer和BHQ标记的互补单链，37摄氏度混合30min，测FAM荧光，强度从266下降到10左右。后加入ATP溶液0-40mM，加到40mM后，FAM荧光也只恢复到15左右。
感觉很多文献，这个恢复都很简单也和强烈，不知道我这个为什么做出来总是这么低。缓冲液是HEPES 5mM，137mM NaCl，10mM MgCl2,7.4。各浓度的ATP溶液都用NaOH调节到pH为7.4左右。
求助各位，问题出在哪？缓冲液还是什么？感觉条件已经控制的不错了，还是不行。@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw
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1楼 2016-12-05 17:50:52
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Liu19851225

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

请问各位都是用什么仪器检测的，有人用酶标仪检测荧光吗？求交流
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5楼2019-12-26 16:44:51
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余荃0815

铁虫 (初入文坛)
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2017-05-02 19:29:08
请问楼主 问题已经解决了嘛？？？？~也遇到同样问题
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2楼2017-05-02 18:03:58
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于新生ing

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

MgCl2 （10mM）和NaCl (100mM)的作用是相同的，都是让互补链更容易杂交。所以你可以尝试下只选用NaCl (10mM)来尝试一下，也就是不加MgCl2；因为在体系中各种离子都有可能影响DNA双链的解旋。此外，你还应该考虑在你加入的ATP 中是否存在能影响恢复的各种物质。你可以做控制实验，分析下那种物质影响了你的实验结果。祝你实验顺利。
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3楼2017-10-23 09:54:19
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爱说谎话的羊

新虫 (初入文坛)
请问我用量子点-Apt，为什么加入目标物荧光会猝灭？即使我用猝灭剂将其荧光猝灭，再加入目标物其荧光也能进一步降低？
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4楼2019-12-19 11:17:55
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