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百金求助！ATP aptamer 5’FAM标记后被互补链BHQ淬灭。加入ATP后，恢复不明显！！ 已有4人参与
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实验过程是这样的，把FAM标记的aptamer和BHQ标记的互补单链，37摄氏度混合30min，测FAM荧光，强度从266下降到10左右。后加入ATP溶液0-40mM，加到40mM后，FAM荧光也只恢复到15左右。 感觉很多文献，这个恢复都很简单也和强烈，不知道我这个为什么做出来总是这么低。缓冲液是HEPES 5mM，137mM NaCl，10mM MgCl2,7.4。各浓度的ATP溶液都用NaOH调节到pH为7.4左右。 求助各位，问题出在哪？缓冲液还是什么？感觉条件已经控制的不错了，还是不行。@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw |
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