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ly881515

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] 百金求助!ATP aptamer 5’FAM标记后被互补链BHQ淬灭。加入ATP后,恢复不明显!! 已有4人参与

实验过程是这样的,把FAM标记的aptamer和BHQ标记的互补单链,37摄氏度混合30min,测FAM荧光,强度从266下降到10左右。后加入ATP溶液0-40mM,加到40mM后,FAM荧光也只恢复到15左右。
感觉很多文献,这个恢复都很简单也和强烈,不知道我这个为什么做出来总是这么低。缓冲液是HEPES 5mM,137mM NaCl,10mM MgCl2,7.4。各浓度的ATP溶液都用NaOH调节到pH为7.4左右。
求助各位,问题出在哪?缓冲液还是什么?感觉条件已经控制的不错了,还是不行。@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw
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新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 爱说谎话的羊 at 2019-12-19 11:17:55
请问我用量子点-Apt,为什么加入目标物荧光会猝灭?即使我用猝灭剂将其荧光猝灭,再加入目标物其荧光也能进一步降低?

问题解决了吗?什么原因想咨询一下

发自小木虫Android客户端
8楼2020-12-21 14:14:16
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余荃0815

铁虫 (初入文坛)

西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2017-05-02 19:29:08
请问楼主 问题已经解决了嘛????~也遇到同样问题
2楼2017-05-02 18:03:58
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于新生ing

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

MgCl2 (10mM)和NaCl (100mM)的作用是相同的,都是让互补链更容易杂交。所以你可以尝试下只选用NaCl (10mM)来尝试一下,也就是不加MgCl2;因为在体系中各种离子都有可能影响DNA双链的解旋。此外,你还应该考虑在你加入的ATP 中是否存在能影响恢复的各种物质。你可以做控制实验,分析下那种物质影响了你的实验结果。祝你实验顺利。
3楼2017-10-23 09:54:19
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爱说谎话的羊

新虫 (初入文坛)

请问我用量子点-Apt,为什么加入目标物荧光会猝灭?即使我用猝灭剂将其荧光猝灭,再加入目标物其荧光也能进一步降低?
4楼2019-12-19 11:17:55
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