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汕头大学海洋科学接受调剂
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jing井妮

银虫 (小有名气)


[交流] Crispr载体构建的问题求指教

在构建crispr载体时, 20bp的选择要求序列后面有个PAM序列,即NGG。
而在设计sgRNA时,会有正义链和反义链,那么反义链就是CCN后面跟着20bp.
麻烦问下各位,这里的正义链和反义链有差别吗?会对突变效果有影响吗?
另外把反义链接入载体里面时,是不是还要反向互补过来,将反义链的互补序列连入载体的正向序列里?
刚开始做crispr,求指导。
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不吃M的鱼

金虫 (小有名气)



jing井妮(金币+1): 谢谢参与
正义链反义链是要退火的。。。然后连到载体上。都不用包含PAM序列

发自小木虫Android客户端
8楼2016-11-28 17:25:29
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查看全部 13 个回答

迷路人啊

新虫 (小有名气)



jing井妮(金币+1): 谢谢参与
sgRnA是转录出来的   只要你保证能转录出你想要的sgrna就行了

发自小木虫IOS客户端
7楼2016-11-28 16:49:24
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草溪河

铁虫 (著名写手)



jing井妮(金币+1): 谢谢参与
gRNA引物不用含NGG,同时正反向引物为互补配对得两条链。往上有很多网站可设计该引物

发自小木虫Android客户端
9楼2016-11-28 17:52:14
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jing井妮

银虫 (小有名气)


引用回帖:
7楼: Originally posted by 迷路人啊 at 2016-11-28 16:49:24
sgRnA是转录出来的   只要你保证能转录出你想要的sgrna就行了

是不是sgRNA连入载体的方向要和基因中的序列顺序一致?分不分正反链?
12楼2016-11-28 19:47:38
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