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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » Crispr载体构建的问题求指教
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jing井妮

银虫 (小有名气)

[交流] Crispr载体构建的问题求指教

在构建crispr载体时， 20bp的选择要求序列后面有个PAM序列，即NGG。
而在设计sgRNA时，会有正义链和反义链，那么反义链就是CCN后面跟着20bp.
麻烦问下各位，这里的正义链和反义链有差别吗？会对突变效果有影响吗？
另外把反义链接入载体里面时，是不是还要反向互补过来，将反义链的互补序列连入载体的正向序列里？
刚开始做crispr,求指导。
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1楼 2016-11-28 15:22:59
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jing井妮

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 迷路人啊 at 2016-11-28 16:49:24
sgRnA是转录出来的   只要你保证能转录出你想要的sgrna就行了

是不是sgRNA连入载体的方向要和基因中的序列顺序一致？分不分正反链？
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12楼2016-11-28 19:47:38
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迷路人啊

新虫 (小有名气)
★
jing井妮(金币+1): 谢谢参与
sgRnA是转录出来的   只要你保证能转录出你想要的sgrna就行了

发自小木虫IOS客户端
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7楼2016-11-28 16:49:24
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不吃M的鱼

金虫 (小有名气)
★
jing井妮(金币+1): 谢谢参与
正义链反义链是要退火的。。。然后连到载体上。都不用包含PAM序列

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8楼2016-11-28 17:25:29
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草溪河

铁虫 (著名写手)
★
jing井妮(金币+1): 谢谢参与
gRNA引物不用含NGG，同时正反向引物为互补配对得两条链。往上有很多网站可设计该引物

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9楼2016-11-28 17:52:14
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