应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » Crispr载体构建的问题求指教
131/1返回列表
查看: 4519  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jing井妮

银虫 (小有名气)

[交流] Crispr载体构建的问题求指教

在构建crispr载体时， 20bp的选择要求序列后面有个PAM序列，即NGG。
而在设计sgRNA时，会有正义链和反义链，那么反义链就是CCN后面跟着20bp.
麻烦问下各位，这里的正义链和反义链有差别吗？会对突变效果有影响吗？
另外把反义链接入载体里面时，是不是还要反向互补过来，将反义链的互补序列连入载体的正向序列里？
刚开始做crispr,求指导。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2016-11-28 15:22:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

迷路人啊

新虫 (小有名气)
★
jing井妮(金币+1): 谢谢参与
sgRnA是转录出来的   只要你保证能转录出你想要的sgrna就行了

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
7楼2016-11-28 16:49:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不吃M的鱼

金虫 (小有名气)
★
jing井妮(金币+1): 谢谢参与
正义链反义链是要退火的。。。然后连到载体上。都不用包含PAM序列

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-11-28 17:25:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

草溪河

铁虫 (著名写手)
★
jing井妮(金币+1): 谢谢参与
gRNA引物不用含NGG，同时正反向引物为互补配对得两条链。往上有很多网站可设计该引物

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2016-11-28 17:52:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jing井妮

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 迷路人啊 at 2016-11-28 16:49:24
sgRnA是转录出来的   只要你保证能转录出你想要的sgrna就行了

是不是sgRNA连入载体的方向要和基因中的序列顺序一致？分不分正反链？
赞一下 回复此楼
12楼2016-11-28 19:47:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青云丹鹤

至尊木虫 (文坛精英)
★
jing井妮(金币+1): 谢谢参与
不了解，祝顺利
回复此楼
13楼2016-11-28 20:33:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
wtbccq5052楼
2016-11-28 16:07   回复  
jing井妮(金币+1): 谢谢参与
超级老快3楼
2016-11-28 16:11   回复  
jing井妮(金币+1): 谢谢参与
超级老快4楼
2016-11-28 16:12   回复  
psylhh5楼
2016-11-28 16:12   回复  
jing井妮(金币+1): 谢谢参与
hydzp6楼
2016-11-28 16:13   回复  
jing井妮(金币+1): 谢谢参与
a
shenrenren10楼
2016-11-28 19:08   回复  
jing井妮(金币+1): 谢谢参与
tan91411楼
2016-11-28 19:13   回复  
jing井妮(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员IG5Gu9 的主题更新
131/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +7 vv迷 2026-03-22 7/350 2026-03-23 23:44 by Txy@872106
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +17 chaojifeixia 2026-03-19 19/950 2026-03-23 23:26 by 呆呆师姐
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +3 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 3/150 2026-03-23 20:47 by pswait
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +3 Promise-jyl 2026-03-23 3/150 2026-03-23 13:43 by wangkm
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +8 材料学257求调剂 2026-03-23 9/450 2026-03-23 13:01 by ztnimte
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[考研] 286求调剂 +10 Faune 2026-03-21 10/500 2026-03-21 23:34 by 314126402
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 一志愿南大，0703化学，分数336，求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 265求调剂 +3 Jack?k?y 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:17 by JourneyLucky
[考研] 初始318分求调剂（有工作经验） +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 12/600 2026-03-20 12:25 by lidianxing
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭