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doctor_phd

新虫 (正式写手)

[求助] 蛋白表达可溶,但是纯化时出现沉淀

大家好,我有一个蛋白是分枝杆菌里面的,在大肠里面异源表达,能够表达出可溶性蛋白,但是在纯化过程中和Ni柱结合时,蛋白发生了很严重沉淀【不是因为在震动太剧烈】,而且在后面透析【或者直接脱盐柱】除掉咪唑时又再一次出现很严重的沉淀,我们推测是因为蛋白虽然表达了,但是没有再大肠中正常折叠,不知道各位大神有没有碰到这种清况或者有这方面的经验,谢谢各位啦,感激不尽!
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ylz2433

新虫 (小有名气)

经常遇到,是蛋白浓度太高导致呢,在透析液里加入5%( v/v)甘油会有改善

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努力,加油!
10楼2016-11-17 08:59:44
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doctor_phd

新虫 (正式写手)

求各位大神解答
2楼2016-11-13 12:37:32
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

估计是蛋白浓度高了,需要较高离子强度去平衡蛋白之间的相互作用。你分析一下你这个蛋白的表面电荷分布,估计有集中区域的正电荷和集中区域的负电荷。

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3楼2016-11-14 22:00:14
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furongzhen

新虫 (小有名气)

4楼2016-11-15 15:45:26
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furongzhen

新虫 (小有名气)

没有在大肠中'正常折叠和可溶性是否有矛盾

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5楼2016-11-15 15:46:17
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doctor_phd

新虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by furongzhen at 2016-11-15 15:46:17
没有在大肠中'正常折叠和可溶性是否有矛盾

没有矛盾吧,在大肠中照样可以折叠,只是没有像在原始菌株中那样折叠成有活性的空间构象,这种情况还是比较常见的
6楼2016-11-16 16:53:46
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doctor_phd

新虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by furongzhen at 2016-11-15 15:46:17
没有在大肠中'正常折叠和可溶性是否有矛盾

所以导致蛋白就不是很稳定
7楼2016-11-16 16:59:58
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Fannie_cool

木虫 (正式写手)

尝试提高buffer的盐浓度,或者纯化过程加入甘油,或者加入去垢剂。确定一下蛋白底物,补加一些作用底物或者一些辅助金属离子。希望会有帮助!

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8楼2016-11-16 17:25:50
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llyy2221

木虫 (小有名气)

9楼2016-11-17 08:40:25
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