应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 蛋白表达可溶，但是纯化时出现沉淀
131/2返回列表12下一页
查看: 1688  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

doctor_phd

新虫 (正式写手)

[求助] 蛋白表达可溶，但是纯化时出现沉淀

大家好，我有一个蛋白是分枝杆菌里面的，在大肠里面异源表达，能够表达出可溶性蛋白，但是在纯化过程中和Ni柱结合时，蛋白发生了很严重沉淀【不是因为在震动太剧烈】，而且在后面透析【或者直接脱盐柱】除掉咪唑时又再一次出现很严重的沉淀，我们推测是因为蛋白虽然表达了，但是没有再大肠中正常折叠，不知道各位大神有没有碰到这种清况或者有这方面的经验，谢谢各位啦，感激不尽！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-11-13 12:36:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ylz2433

新虫 (小有名气)
经常遇到，是蛋白浓度太高导致呢，在透析液里加入5%（ v/v）甘油会有改善

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
努力，加油！
10楼2016-11-17 08:59:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

doctor_phd

新虫 (正式写手)
求各位大神解答
回复此楼
2楼2016-11-13 12:37:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
估计是蛋白浓度高了，需要较高离子强度去平衡蛋白之间的相互作用。你分析一下你这个蛋白的表面电荷分布，估计有集中区域的正电荷和集中区域的负电荷。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-11-14 22:00:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

furongzhen

新虫 (小有名气)
蛋白不稳定

发自小木虫Android客户端
回复此楼
4楼2016-11-15 15:45:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

furongzhen

新虫 (小有名气)
没有在大肠中'正常折叠和可溶性是否有矛盾

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2016-11-15 15:46:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doctor_phd

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by furongzhen at 2016-11-15 15:46:17
没有在大肠中'正常折叠和可溶性是否有矛盾

没有矛盾吧，在大肠中照样可以折叠，只是没有像在原始菌株中那样折叠成有活性的空间构象，这种情况还是比较常见的
赞一下 回复此楼
6楼2016-11-16 16:53:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doctor_phd

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by furongzhen at 2016-11-15 15:46:17
没有在大肠中'正常折叠和可溶性是否有矛盾

所以导致蛋白就不是很稳定
赞一下 回复此楼
7楼2016-11-16 16:59:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Fannie_cool

木虫 (正式写手)
尝试提高buffer的盐浓度，或者纯化过程加入甘油，或者加入去垢剂。确定一下蛋白底物，补加一些作用底物或者一些辅助金属离子。希望会有帮助！

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-11-16 17:25:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

llyy2221

木虫 (小有名气)
更换缓冲液体系试试

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2016-11-17 08:40:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 doctor_phd 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 02:21 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 7/350 2026-08-15 00:40 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 HFw0lei2R37i 2026-08-14 8/400 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] filecode +6 cratir 2026-08-14 10/500 2026-08-14 18:29 by 笑叹辞穷
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭