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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » western blot问题求教
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18843419153

新虫 (初入文坛)

[求助] western blot问题求教 已有3人参与

最近做植物western。前期的工作都不错。转膜是200MA 1.5小时 抗体是45kd的action。二抗是hrp的。可是最后用化学发光成像仪看就是这样的。很苦恼。求解释。或者可以给我一个做过的全步骤也好。 麻烦各位兄弟姐妹了

western blot问题求教


western blot问题求教-1


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1楼 2016-11-04 16:36:48
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段李晓彤

银虫 (正式写手)

院士虫
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-05 22:49:34
我们用的湿转300ma，50分钟，是不是显影液错了，或者一抗二抗用错了

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2楼2016-11-05 08:06:25
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18843419153

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 段李晓彤 at 2016-11-05 08:06:25
我们用的湿转300ma，50分钟，是不是显影液错了，或者一抗二抗用错了

我用的是ecl化学发光。  试剂盒1:1配的 能看到marker是显影液的事吗？ 抗体选的是内参蛋白抗体。可是没做出来。 很郁闷。 天天查也没有个所以然啊。 能不能是转膜过了啊。 还有抗体稀释液也没有啥要求。 我一抗二抗用的是我们实验室别人做组织免疫用的买的抗体稀释液。这个问题大不大

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3楼2016-11-05 09:01:04
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田生帅菜

新虫 (正式写手)
检actin很容易。

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4楼2016-11-05 22:32:23
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田生帅菜

新虫 (正式写手)
换抗体吧

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5楼2016-11-05 22:32:52
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18843419153

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 田生帅菜 at 2016-11-05 22:32:52
换抗体吧

我是新换的抗体啊。 会是抗体的问题吗？

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6楼2016-11-06 08:55:51
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田生帅菜

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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引用回帖:
6楼: Originally posted by 18843419153 at 2016-11-06 08:55:51
我是新换的抗体啊。 会是抗体的问题吗？
...

我们用的是西格玛的一抗，一比一万稀释，红外二抗。既然你用的是hrp，可以试试DAB显色

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7楼2016-11-06 09:51:50
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18843419153

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 田生帅菜 at 2016-11-06 09:51:50
我们用的是西格玛的一抗，一比一万稀释，红外二抗。既然你用的是hrp，可以试试DAB显色
...

哦哦。 我现在就是不知道到底是实验步骤的问题还是说是别的什么问题。

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8楼2016-11-06 14:10:17
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liyu6655

禁虫 (小有名气)
★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-08 07:13:46
本帖内容被屏蔽
9楼2016-11-06 14:10:51
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18843419153

新虫 (初入文坛)
哦哦  这样啊  蛋白提取完没定量  就是跑了电泳  在胶上考染完以后是有条带的啊  会是蛋白提取的问题吗？

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10楼2016-11-06 14:13:14
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