39楼: Originally posted by wugenpeng at 2016-11-02 09:16:34
Tm值加的片段不算，...

37楼: Originally posted by C小杨 at 2016-11-01 09:43:34
退火温度按照另外一条短的引物的就好了。质粒等简单模板的话很容易扩增，基因组等复杂模板的话也许会有杂带，那就切个胶或者设计带和不带33bp两条引物，先用短的扩增个单一模板出来，再用长的扩增。我们经常用长40 ...

36楼: Originally posted by winyuyuyu123 at 2016-11-01 08:29:56
是的，就是加在引物的5’端，至于是加在正向引物还是反向，就看你要掺入到序列的哪一端了
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35楼: Originally posted by WilliamHJ at 2016-11-01 07:44:48
可以，或者选用较低的那个就行
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34楼: Originally posted by 小冀- at 2016-10-31 19:07:28
嗯，然后p的时候减5
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31楼: Originally posted by WilliamHJ at 2016-10-31 15:28:48
你不放心的话，可以先用配对区的退火温度扩增5个循环，再用全长退火温度接着扩增25-30个循环就好了。如果全长退火温度大于延伸温度就设成延伸温度
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34楼: Originally posted by 小冀- at 2016-10-31 19:07:28
嗯，然后p的时候减5
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