29楼: Originally posted by 549088894 at 2016-10-31 15:12:07
这个扩增几轮后模版不就存在有加了33bp的片段了吗？退火温度还对吗？
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30楼: Originally posted by 小冀- at 2016-10-31 15:15:34
对的，影响不会太大，完全可以p出来的
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31楼: Originally posted by WilliamHJ at 2016-10-31 15:28:48
你不放心的话，可以先用配对区的退火温度扩增5个循环，再用全长退火温度接着扩增25-30个循环就好了。如果全长退火温度大于延伸温度就设成延伸温度
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32楼: Originally posted by 549088894 at 2016-10-31 19:00:30
如果还想加个酶切位点，那我退火温度是按上下游除去33bp及酶切位点的Tm值相加，除以2？
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33楼: Originally posted by 549088894 at 2016-10-31 19:00:40
如果还想加个酶切位点，那我退火温度是按上下游除去33bp及酶切位点的Tm值相加，除以2？
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18楼: Originally posted by 549088894 at 2016-10-31 14:56:47
我想请教下将33个碱基附在引物后边是什么意思？我是要将它加到模版上，应该是在引物前边吧？这样类似于加酶切位点？
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19楼: Originally posted by 549088894 at 2016-10-31 14:58:29
请教下你退火温度该如何设置？加了33bp后退火温度高于延伸温度了
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24楼: Originally posted by 549088894 at 2016-10-31 15:04:10
你最多用到多少bp？请教下你退火温度该如何设置？加了33bp后退火温度高于延伸温度了，引物过长如何防止自身引物结合？
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21楼: Originally posted by 549088894 at 2016-10-31 15:00:26
请教下你退火温度该如何设置？加了33bp后退火温度高于延伸温度了
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38楼: Originally posted by Hauber at 2016-11-01 10:46:41
由于我做的这个片段太短只有30多bp，因为要做融合跟师兄的片段连在一起，然后设计引物的时候就把我的这个碱基全部加到师兄引物的5'端，然后用参照师兄的那个退火温度做了个温度梯度，摸索了一下
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