10楼: Originally posted by wugenpeng at 2016-10-25 10:28:34
我用过最长的，包括保护碱基，一共51bp，应该没问题，

11楼: Originally posted by 小冀- at 2016-10-25 14:34:23
可以的，没问题的，敲除的时候还有用7-80bp的呢，50多不算啥，就当是酶切位点了

12楼: Originally posted by firefly22 at 2016-10-25 22:03:59
可以试试exnase酶的同源重组突变的方式

13楼: Originally posted by WilliamHJ at 2016-10-26 19:34:44
可行的，我经常用长引物的

22楼: Originally posted by 549088894 at 2016-10-31 15:01:19
请教下你退火温度该如何设置？加了33bp后退火温度高于延伸温度了，如何防止引物内部自身结合？
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14楼: Originally posted by Hauber at 2016-10-27 08:41:19
可以的，我现在做融合pcr，引物60多bp

15楼: Originally posted by tfytli at 2016-10-27 11:22:08
这个是可行的，我曾经在5’端加过51个碱基片段，详细的可以私信交流。不过提醒一下，这样设计引物会很贵，非常贵

17楼: Originally posted by luozie at 2016-10-27 16:51:05
可以，50多bp的引物合成很正常，但是要选择合适的引物纯化方法，PAGE纯化就可行；要求高一点使用HPLC纯化（一般引物合成公司HPLC纯化是先PAGE再HPLC纯化；引物价格较高，2.5元左右/bp）；PCR后连接载体克隆测序验证 ...

25楼: Originally posted by 小冀- at 2016-10-31 15:06:09
退火温度只按配对部分计算，酶切位点不算在里边
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29楼: Originally posted by 549088894 at 2016-10-31 15:12:07
这个扩增几轮后模版不就存在有加了33bp的片段了吗？退火温度还对吗？
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