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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 如果是想用PCR将基因片段上没有的33个碱基补充上去，如何设计引物？
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以的，没问题的，敲除的时候还有用7-80bp的呢，50多不算啥，就当是酶切位点了
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···
11楼2016-10-25 14:34:23
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firefly22

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
12楼2016-10-25 22:03:59
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WilliamHJ

金虫 (小有名气)
可行的，我经常用长引物的

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学习中
13楼2016-10-26 19:34:44
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Hauber

新虫 (初入文坛)
可以的，我现在做融合pcr，引物60多bp

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14楼2016-10-27 08:41:19
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tfytli

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个是可行的，我曾经在5’端加过51个碱基片段，详细的可以私信交流。不过提醒一下，这样设计引物会很贵，非常贵

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最令人信服的话莫过于一本正经的胡说八道，外加一点数据。
15楼2016-10-27 11:22:08
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匿名

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16楼2016-10-27 16:50:23
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匿名

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17楼2016-10-27 16:51:05
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549088894

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by winyuyuyu123 at 2016-10-24 15:51:02
应该是可行的，我做融合PCR的时候，引物长度用过46bp，扩增没问题。建议如下：
1.将你的33个碱基附在引物后面，注意序列正确性，保证读码框的正确性。
2.应以原始引物的Tm值（不含这33个碱基）作为参考来设置退火 ...

我想请教下将33个碱基附在引物后边是什么意思？我是要将它加到模版上，应该是在引物前边吧？这样类似于加酶切位点？

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18楼2016-10-31 14:56:47
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549088894

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by C小杨 at 2016-10-24 16:09:47
50多bp不是问题，更长的引物我们都用过。祝好！

请教下你退火温度该如何设置？加了33bp后退火温度高于延伸温度了

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19楼2016-10-31 14:58:29
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549088894

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by C小杨 at 2016-10-24 16:09:47
50多bp不是问题，更长的引物我们都用过。祝好！

请教下你退火温度该如何设置？加了33bp后退火温度高于延伸温度了

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20楼2016-10-31 14:59:21
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