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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » TA 克隆连接转化无结果
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Gengli0909

新虫 (初入文坛)

[求助] TA 克隆连接转化无结果 已有3人参与

大神们，我想问一下将质粒PCR用rtaq酶以后的产物胶回收然后用T载体连接试剂盒连接，转化至自己做的感受态DH5a中，已经重复了很多次，换了五个试剂盒了转化都没有任何菌落生长出，连试剂盒里的阳性对照都一个菌没长，好崩溃，拜托亲们帮帮忙，找一下原因，我愿意给出我所有的金币，但可能是新手有点少，帮帮忙

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1楼 2016-10-20 16:09:54
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Demon黄

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Gengli0909 at 2016-10-20 16:55:57
热激以后摇菌的50min里用的LB应该要加Amp的吧？做质粒直接转化的时候就一直加都有结果，要加了才能筛选吧
...

对了，最后涂板子的时候才是涂氨苄的平板，
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7楼2016-10-20 17:06:14
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Demon黄

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会不会是转化的时候出现问题
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2楼2016-10-20 16:34:26
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Gengli0909

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Demon黄 at 2016-10-20 16:34:26
会不会是转化的时候出现问题

有道理，能再细一点吗，比如说哪个步骤出了问题？

发自小木虫Android客户端
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3楼2016-10-20 16:41:08
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Demon黄

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Gengli0909 at 2016-10-20 16:41:08
有道理，能再细一点吗，比如说哪个步骤出了问题？
...

热休克后应该加入无氨苄抗性的LB，然后再摇菌50分钟
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4楼2016-10-20 16:51:15
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