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Gengli0909

新虫 (初入文坛)

[求助] TA 克隆连接转化无结果已有3人参与

大神们,我想问一下将质粒PCR用rtaq酶以后的产物胶回收然后用T载体连接试剂盒连接,转化至自己做的感受态DH5a中,已经重复了很多次,换了五个试剂盒了转化都没有任何菌落生长出,连试剂盒里的阳性对照都一个菌没长,好崩溃,拜托亲们帮帮忙,找一下原因,我愿意给出我所有的金币,但可能是新手有点少,帮帮忙

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Gengli0909

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Demon黄 at 2016-10-20 16:34:26
会不会是转化的时候出现问题

有道理,能再细一点吗,比如说哪个步骤出了问题?

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3楼2016-10-20 16:41:08
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Demon黄

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
会不会是转化的时候出现问题
2楼2016-10-20 16:34:26
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Demon黄

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Gengli0909 at 2016-10-20 16:41:08
有道理,能再细一点吗,比如说哪个步骤出了问题?
...

热休克后应该加入无氨苄抗性的LB,然后再摇菌50分钟
4楼2016-10-20 16:51:15
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Gengli0909

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Demon黄 at 2016-10-20 16:51:15
热休克后应该加入无氨苄抗性的LB,然后再摇菌50分钟...

热激以后摇菌的50min里用的LB应该要加Amp的吧?做质粒直接转化的时候就一直加都有结果,要加了才能筛选吧

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5楼2016-10-20 16:55:57
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