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huhao0230

金虫 (初入文坛)

[求助] 求教,同源重组法使两个目的片段与载体连接,重组完成第一个目的片段缺失一部分 已有1人参与

请教大神,同源重组法使两个目的片段与载体连接,重组完成第一个目的片段总是缺失一部分。。。
使用Vazyme一步克隆试剂盒,同源重组法使两个目的片段与载体连接,重组完成测序发现两个目的片段能与载体连接,但第一个目的片段却缺失前半部分,很诡异~~
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hzau103

新虫 (正式写手)

3楼2017-07-04 22:33:07
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梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
会遇到的,多筛选,测序!

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2楼2016-10-19 19:38:27
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思想如翅

铁虫 (初入文坛)

楼主,我用诺唯赞的exnase Ⅱ,连接载体和一个片段,测序显示片段首尾都跟载体连接上了,就是中间缺失大约1000bp,你找到原因了吗?
世上无难事
4楼2018-01-25 23:04:21
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遊俠

新虫 (小有名气)


drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-07-03 01:02:14
有没有可能是目的序列里面还有其他的酶切位点?这个带同源臂的引物必须要设计好,你可以检测一下第一个目的片段扩增的有没有问题,电泳鉴定或者测序,万一不行了就分步来做,分两次重组。

发自小木虫Android客户端
5楼2018-01-29 23:12:59
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