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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 求教，同源重组法使两个目的片段与载体连接，重组完成第一个目的片段缺失一部分
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huhao0230

金虫 (初入文坛)

[求助] 求教，同源重组法使两个目的片段与载体连接，重组完成第一个目的片段缺失一部分 已有1人参与

请教大神，同源重组法使两个目的片段与载体连接，重组完成第一个目的片段总是缺失一部分。。。
使用Vazyme一步克隆试剂盒，同源重组法使两个目的片段与载体连接，重组完成测序发现两个目的片段能与载体连接，但第一个目的片段却缺失前半部分，很诡异~~
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1楼 2016-10-19 11:01:47
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梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会遇到的，多筛选，测序！

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2楼2016-10-19 19:38:27
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hzau103

新虫 (正式写手)
还有金币？

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3楼2017-07-04 22:33:07
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思想如翅

铁虫 (初入文坛)
楼主，我用诺唯赞的exnase Ⅱ,连接载体和一个片段，测序显示片段首尾都跟载体连接上了，就是中间缺失大约1000bp，你找到原因了吗？
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世上无难事
4楼2018-01-25 23:04:21
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遊俠

新虫 (小有名气)
★
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-07-03 01:02:14
有没有可能是目的序列里面还有其他的酶切位点？这个带同源臂的引物必须要设计好，你可以检测一下第一个目的片段扩增的有没有问题，电泳鉴定或者测序，万一不行了就分步来做，分两次重组。

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5楼2018-01-29 23:12:59
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追月亮的猫

新虫 (初入文坛)
您好，你的问题最后是怎么解决的啊？我最近也遇到类似的情况
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6楼2018-07-02 16:04:48
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yiyi9-

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 思想如翅 at 2018-01-25 23:04:21
楼主，我用诺唯赞的exnase Ⅱ,连接载体和一个片段，测序显示片段首尾都跟载体连接上了，就是中间缺失大约1000bp，你找到原因了吗？

你好，我最近用Neb的重组酶也出现了这个问题，目的片段4500，首尾连上了2000左右，请问下你后续有知道什么原因或者解决了吗
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7楼2022-04-13 20:19:45
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