应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 求教，同源重组法使两个目的片段与载体连接，重组完成第一个目的片段缺失一部分
71/1返回列表
查看: 6511  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

huhao0230

金虫 (初入文坛)

[求助] 求教，同源重组法使两个目的片段与载体连接，重组完成第一个目的片段缺失一部分 已有1人参与

请教大神，同源重组法使两个目的片段与载体连接，重组完成第一个目的片段总是缺失一部分。。。
使用Vazyme一步克隆试剂盒，同源重组法使两个目的片段与载体连接，重组完成测序发现两个目的片段能与载体连接，但第一个目的片段却缺失前半部分，很诡异~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2016-10-19 11:01:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会遇到的，多筛选，测序！

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-10-19 19:38:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hzau103

新虫 (正式写手)
还有金币？

发自小木虫Android客户端
回复此楼
3楼2017-07-04 22:33:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

思想如翅

铁虫 (初入文坛)
楼主，我用诺唯赞的exnase Ⅱ,连接载体和一个片段，测序显示片段首尾都跟载体连接上了，就是中间缺失大约1000bp，你找到原因了吗？
赞一下 回复此楼
世上无难事
4楼2018-01-25 23:04:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

遊俠

新虫 (小有名气)
★
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-07-03 01:02:14
有没有可能是目的序列里面还有其他的酶切位点？这个带同源臂的引物必须要设计好，你可以检测一下第一个目的片段扩增的有没有问题，电泳鉴定或者测序，万一不行了就分步来做，分两次重组。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2018-01-29 23:12:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

追月亮的猫

新虫 (初入文坛)
您好，你的问题最后是怎么解决的啊？我最近也遇到类似的情况
赞一下 回复此楼
6楼2018-07-02 16:04:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yiyi9-

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 思想如翅 at 2018-01-25 23:04:21
楼主，我用诺唯赞的exnase Ⅱ,连接载体和一个片段，测序显示片段首尾都跟载体连接上了，就是中间缺失大约1000bp，你找到原因了吗？

你好，我最近用Neb的重组酶也出现了这个问题，目的片段4500，首尾连上了2000左右，请问下你后续有知道什么原因或者解决了吗
赞一下 回复此楼
7楼2022-04-13 20:19:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 huhao0230 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 06:46 by ZPa0EcMwuECS
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 06:35 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 06:22 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 13/650 2026-08-30 05:38 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 02:40 by ZPa0EcMwuECS
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:47 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 01:12 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-30 01:03 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-30 00:41 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 国社科申报系统有变化 +3 kynobel 2026-08-23 3/150 2026-08-29 21:57 by 余韵清
[基金申请] 面上意见出来了 +8 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 16/800 2026-08-29 20:45 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭