应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » hi-TAIL PCR问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
121/2返回列表12下一页
查看: 2583  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

15836073150

金虫 (小有名气)

[求助] hi-TAIL PCR问题 已有2人参与

我知道基因的编码区，想扩基因的启动子，然后做的hi-TAIL PCR，结果扩出来的片段非常短只有二三百bp，而且是这个基因的5’端，还不是启动子，请问有遇到这种问题的吗，该怎么解决啊。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-10-08 18:54:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xihadream

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by longanzz at 2016-10-12 10:10:06
一点点向前移动，你是根据你基因的DNA序列设计的引物吗？

你好！最近在做基因克隆，希望用转录组测序获得的CDS序列设计的引物，通过PCR获得基因的全长序列，应该怎么设计引物呢？
赞一下(1人) 回复此楼
勿忘初心，持续改变
10楼2017-01-11 23:22:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

longanzz

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
15836073150: 金币+2, ★有帮助 2016-10-12 10:35:58
15836073150: 金币+2 2016-10-13 09:45:37
一点点向前移动，你是根据你基因的DNA序列设计的引物吗？
赞一下 回复此楼
2楼2016-10-12 10:10:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

15836073150

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by longanzz at 2016-10-12 10:10:06
一点点向前移动，你是根据你基因的DNA序列设计的引物吗？

谢谢您的回复，第一次做的时候是根据保守区设计的下游引物，结果扩出来了前面的内含子，后来在前面内含子区设计的下游引物，结果就扩出来了二三百bp的片段，而且不是启动子，这是什么原因啊。
赞一下 回复此楼
3楼2016-10-12 10:35:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longanzz

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
15836073150: 金币+2 2016-10-13 09:45:44
可能是非编码区，你还是以基因组序列设计上下游引物比较好，一般都会得到启动子序列，就是长短的问题啊。
赞一下 回复此楼
4楼2016-10-13 09:25:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

star013

新虫 (知名作家)
我们可以提供该技术服务

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2016-10-13 09:40:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxb377515727

金虫 (小有名气)
你好，我现在也在做这个TAIL-PCR。你能告诉我你的这个PCR体系具体的量吗？
比如LAD加多少微升还有其他的？
赞一下 回复此楼
故事是缓缓写到结局的
6楼2016-11-02 17:10:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

15836073150

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wxb377515727 at 2016-11-02 17:10:44
你好，我现在也在做这个TAIL-PCR。你能告诉我你的这个PCR体系具体的量吗？
比如LAD加多少微升还有其他的？

第一轮：模板1微升，LAD1微升，sp1 0.3微升，MIX 10微升，水7.7微升
第二轮：模板1微升，AC 0.3    SP2  0.3  
第三轮：模板1微升，AC 0.6    sp3  0.6
我是按实验室师姐的体系加的，程序估计都差不多吧！可是我现在跑出来的还是太短，你做出来了有机会讨论讨论。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2016-11-03 14:33:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxb377515727

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 15836073150 at 2016-11-03 14:33:56
第一轮：模板1微升，LAD1微升，sp1 0.3微升，MIX 10微升，水7.7微升
第二轮：模板1微升，AC 0.3    SP2  0.3  
第三轮：模板1微升，AC 0.6    sp3  0.6
我是按实验室师姐的体系加的，程序估计都差不多吧！可是我现 ...

还想问下，你的sp1.lad，ac1是多少微摩尔呢？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
故事是缓缓写到结局的
8楼2016-11-03 19:11:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

15836073150

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wxb377515727 at 2016-11-03 19:11:37
还想问下，你的sp1.lad，ac1是多少微摩尔呢？
...

浓度吗，都是10

发自小木虫Android客户端
回复此楼
9楼2016-11-03 19:12:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 15836073150 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 299求调剂 +8 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 8/400 2026-03-31 18:23 by lizhi8172
[电化学] 070300化学调剂 +5 山顶见α 2026-03-25 5/250 2026-03-31 17:02 by 544594351
[考研] 一志愿西交大080500材料学硕349 +5 jqx1258 2026-03-31 6/300 2026-03-31 16:16 by 记事本2026
[考研] 277跪求调剂 +8 1915668 2026-03-27 13/650 2026-03-31 14:58 by 王亮_大连医科大
[考研] 土木304求调剂 +3 顶级擦擦 2026-03-31 3/150 2026-03-31 13:59 by 西京学院招办
[考研] 266分，求材料相关专业调剂 +10 哇呼哼呼哼 2026-03-30 12/600 2026-03-31 11:00 by 熊一刀
[考研] 南京大学化学调剂 +11 景随风 2026-03-29 16/800 2026-03-31 10:14 by herarysara
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-31 4/200 2026-03-31 10:04 by cal0306
[考研] 359求调剂 +5 王了个楠 2026-03-25 5/250 2026-03-30 19:36 by 源_2020
[考研] 一志愿厦门大学材料工程专硕354找调剂！！！ +5 贝呗钡钡 2026-03-30 5/250 2026-03-30 18:16 by 无际的草原
[考研] 考研调剂 +5 Sanmu-124 2026-03-26 5/250 2026-03-30 13:36 by chemdavid
[考研] 一志愿北京工业大学，324分求调剂 +6 零八# 2026-03-28 6/300 2026-03-29 21:20 by nanaliuyun
[考研] 298求调剂 +3 种圣赐 2026-03-29 3/150 2026-03-29 12:06 by longlotian
[考研] 305求调剂 +8 RuiFairyrui 2026-03-28 8/400 2026-03-29 08:22 by fmesaito
[考研] 070300求调剂306分 +4 26要上岸 2026-03-27 4/200 2026-03-28 13:06 by 唐沐儿
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-27 7/350 2026-03-28 07:43 by 热情沙漠
[考研] 085600，材料与化工321分，求调剂 +9 大馋小子 2026-03-27 9/450 2026-03-27 14:30 by mmm just
[考研] 调剂推荐 +5 清酒714 2026-03-26 6/300 2026-03-27 11:12 by 不吃魚的貓
[考研] 286求调剂 +4 lim0922 2026-03-26 4/200 2026-03-27 10:28 by guoweigw
[考研] 一志愿 南京邮电大学 288分 材料考研 求调剂 +3 jl0720 2026-03-26 3/150 2026-03-26 13:39 by zzll406
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭