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殷筱婕

新虫 (初入文坛)

[求助] 大神求助,酶切,琼脂糖凝胶电泳,你所没见过的奇异情况,我无法解释

如图,这两个图的marker和dna样品都是同样的,一个是今天做的120v的电压(picture 1),还一个是昨天做的70v的电压(picture 2),可是却发现,按理说同样样品和marker,条带应该一致也与marker对应的位置一致,可是现在却显现的位置不一样了,请问这是为什么呢?有哪些可能造成的原因呢?谢谢
另外,我这个是酶切的鉴定(adeasy system, 最后一步用pac I 酶切线性化,然后转到293a细胞内。),泳道1,3是对照,没有酶切,2,4是pac I 酶切的,这样的结果算是酶切成功吗?
注释:TBE是0.5%, 胶的浓度是0.7% agarose。

大神求助,酶切,琼脂糖凝胶电泳,你所没见过的奇异情况,我无法解释
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大神求助,酶切,琼脂糖凝胶电泳,你所没见过的奇异情况,我无法解释-1
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ken19860823

木虫 (正式写手)

你TBE的胶为什么用TAE来跑呢,然后你的载体线性化怎么切成两段了(还是说没有完全线性化)。线性化一般要带质粒MARKER的,我们公司用的supercoil DNA ladder 估计你用不了,最大是1W3的好像,你的质粒应该在1W5以上吧。
做基因修饰的老菜鸡
2楼2016-09-27 10:39:16
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殷筱婕

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ken19860823 at 2016-09-27 10:39:16
你TBE的胶为什么用TAE来跑呢,然后你的载体线性化怎么切成两段了(还是说没有完全线性化)。线性化一般要带质粒MARKER的,我们公司用的supercoil DNA ladder 估计你用不了,最大是1W3的好像,你的质粒应该在1W5以上 ...

我是用0.5%TBE配胶和跑胶的。我的质粒分子量在40kb左右,酶切之后应该是在36kb左右和一个3.5kb左右的条带,但是我用PAC I 酶切之后并没有出现这两个条带
3楼2016-09-27 23:22:55
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ken19860823

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 殷筱婕 at 2016-09-27 23:22:55
我是用0.5%TBE配胶和跑胶的。我的质粒分子量在40kb左右,酶切之后应该是在36kb左右和一个3.5kb左右的条带,但是我用PAC I 酶切之后并没有出现这两个条带...

你测序通过没,如果你测序通过了,换一个大点的marker,只要你的那条大条带是36kb,基本没问题,如果不保险找一个单酶切位点做对照。电压控制在110V看看,时间跑长一下。最好能找到质粒marker.做酶切验证或者线性化没对照很头疼的,你的3KB小条带很可能由于你的酶切的量跟染料的关系不显示的,不过线性化的量一般是5ug左右,理论上是必须看得到的。
做基因修饰的老菜鸡
4楼2016-09-28 09:12:31
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