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双酶切分子克隆的分子过程 已有7人参与
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| 引物上含酶切序列，但是PCR产物不是有一部分只含有一条合成的引物吗？这样不是只有其中一条链含有一种酶切序列？怎么双酶切法。。我的分子生物学方面学的很差不是很理解。印象中双酶切是两种酶同时切割目的片段和载体，按照PCR过程有一条模板链一条合成链，只有合成链才有引物才有酶切序列呀，虽然会有一部分合成链会成为模板，但还是有很多pcr产物是一条模板链一条合成链的吧 |
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010308Jing
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4楼2016-09-17 12:52:08
010308Jing
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juzhixianwei
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-17 06:44:59
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因为起始的模板量很低，所以PCR产物主要还是合成链，合成链是双链DNA,两头分别是两段引物，所以含有引物上的酶切序列 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-09-16 16:51:47
3楼2016-09-16 16:52:10
luckydog52
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5楼2016-09-17 21:24:44
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我意思是，根据半保留复制， pcr完成后，产物不是会有一部分DNA，其双链中有一条我们加的模板（上面没有引物），另一条是带有我们合成的引物的合成链吗？这样这部分产物不就只有一个酶切位点了吗 发自小木虫Android客户端 |
6楼2016-09-17 22:12:49
didongwei
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8楼2016-09-18 08:31:43
9楼2016-09-21 05:16:34
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謝謝，不過我的問題在於雙酶切，載體上有兩個切口，那我的目的基因也應該是兩個一樣的切口，然後正向引物和反向引物各有一個酶切位點。那麼理想的情況是正向和反向引物所在的單鏈組成雙鏈，可是我們加入的模板是沒有引物的呀，也我意思就是pcr合成的DNA雙鏈中，其中一种為正向引物結合在5'→3'模板鏈，另一種是反向引物結合在3'→5'模板鏈合成的，這樣新合成的DNA就只含有正向引物或只含有反向引物，也就是只含有一個酶切位點 发自小木虫Android客户端 |
10楼2016-09-22 14:44:29