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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 双酶切分子克隆的分子过程
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华西Aspirin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 010308Jing at 2016-09-18 05:31:44
只有一个酶切位点的产物你做酶连后是转化不出克隆的，不用担心这个问题

嗯。就是這樣…可效率就降低了吧。。

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11楼2016-09-22 14:47:50
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010308Jing

木虫 (正式写手)
★
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这没有关系啊，双酶切是两个不一样的酶分别切你的模板和产物，然后各自形成两对匹配的粘性末端，T4连接酶只有链接作用，如果粘性末端不匹配是连不上的，行不成环装质粒，怎么可能长出克隆呢？这不是效率的问题，就算你说的效率高，长出的也大多是假阳性

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12楼2016-09-22 15:11:42
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迷路人啊

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你说的这种情况只是第一个循环的产物   后面循环就是带有双酶切位点的dna了

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13楼2016-09-22 16:20:48
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didongwei

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by 华西Aspirin at 2016-09-22 14:44:29
謝謝，不過我的問題在於雙酶切，載體上有兩個切口，那我的目的基因也應該是兩個一樣的切口，然後正向引物和反向引物各有一個酶切位點。那麼理想的情況是正向和反向引物所在的單鏈組成雙鏈，可是我們加入的模板是沒 ...

哦，我明白你的盲点啦，事实上DNA是双链，而染色体是双DNA和组蛋白组成的，只是通常情况下有一条DNA是沉默的，现在你应该明白啥意思了吧？

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不是优秀，而是不可替代
14楼2016-09-22 17:26:18
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华西Aspirin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 迷路人啊 at 2016-09-22 16:20:48
你说的这种情况只是第一个循环的产物   后面循环就是带有双酶切位点的dna了

嗯嗯，是醬紫的

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15楼2016-09-25 23:59:12
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