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华西Aspirin

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 010308Jing at 2016-09-18 05:31:44
只有一个酶切位点的产物你做酶连后是转化不出克隆的,不用担心这个问题

嗯。就是這樣…可效率就降低了吧。。

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11楼2016-09-22 14:47:50
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010308Jing

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这没有关系啊,双酶切是两个不一样的酶分别切你的模板和产物,然后各自形成两对匹配的粘性末端,T4连接酶只有链接作用,如果粘性末端不匹配是连不上的,行不成环装质粒,怎么可能长出克隆呢?这不是效率的问题,就算你说的效率高,长出的也大多是假阳性

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12楼2016-09-22 15:11:42
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迷路人啊

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你说的这种情况只是第一个循环的产物   后面循环就是带有双酶切位点的dna了

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13楼2016-09-22 16:20:48
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didongwei

金虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by 华西Aspirin at 2016-09-22 14:44:29
謝謝,不過我的問題在於雙酶切,載體上有兩個切口,那我的目的基因也應該是兩個一樣的切口,然後正向引物和反向引物各有一個酶切位點。那麼理想的情況是正向和反向引物所在的單鏈組成雙鏈,可是我們加入的模板是沒 ...

哦,我明白你的盲点啦,事实上DNA是双链,而染色体是双DNA和组蛋白组成的,只是通常情况下有一条DNA是沉默的,现在你应该明白啥意思了吧?

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不是优秀,而是不可替代
14楼2016-09-22 17:26:18
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华西Aspirin

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 迷路人啊 at 2016-09-22 16:20:48
你说的这种情况只是第一个循环的产物   后面循环就是带有双酶切位点的dna了

嗯嗯,是醬紫的

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15楼2016-09-25 23:59:12
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