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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2026级博士研究生招生报考通知(长期有效)
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 质粒提取出现奇怪的带已有2人参与

大家好:我现在提取大肠杆菌中的质粒(BAC质粒),但是提取后用TE溶解提取的质粒,取了8ul电泳,出现了质粒电泳图中的现象,下面有好几条带,marker用的15000的。后来对提取的质粒单酶切,脉冲电泳,下面还是有好几条亮带,这是RNA吗?感觉不像啊,还是混入了基因组DNA?还是被污染了?还是其他原因?求解答啊

质粒提取出现奇怪的带
质粒提取后电泳.png


质粒提取出现奇怪的带-1
质粒酶切后脉冲电泳.png
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lxin_yu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
lwk5716: 金币+3, 有帮助 2016-08-25 21:15:59
你也可以重新转化一下试试,还有提质粒的时候注意混匀,充分裂解细胞,减少RNA
9楼2016-08-25 15:30:10
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1937mcq

金虫 (初入文坛)

努力后生

感觉时质粒质量不好,可能有杂质,建议重新摇菌,,
心若向阳,无谓悲伤!
14楼2017-01-08 21:46:50
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普通回帖

lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

脉冲电泳图中,从左到右的第二泳道也是15000的marker。
2楼2016-08-22 17:33:57
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xuegyx

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lwk5716: 金币+4, ★★★很有帮助 2016-08-24 10:53:00
你的细胞里面只有BAC这一个质粒还是还有其他的质粒?我记得我以前做DH10细胞,除了BAC外,还有另外两种质粒
3楼2016-08-23 09:26:08
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xuegyx at 2016-08-23 09:26:08
你的细胞里面只有BAC这一个质粒还是还有其他的质粒?我记得我以前做DH10细胞,除了BAC外,还有另外两种质粒

应该是只有BAC质粒啊,你怀疑我里面不止一种质粒?
4楼2016-08-24 10:53:01
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lxin_yu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lwk5716: 金币+3, ★★★很有帮助 2016-08-25 09:43:13
有可能是提取质粒过程中污染了,我之前提过一次DN5x转化质粒,第一次提出来的酶切后出现了比质粒大的条带,第二次就没有了
5楼2016-08-24 16:52:55
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by lxin_yu at 2016-08-24 16:52:55
有可能是提取质粒过程中污染了,我之前提过一次DN5x转化质粒,第一次提出来的酶切后出现了比质粒大的条带,第二次就没有了

酶切后线状质粒比环状的大倒是有可能,你是说我提取的过程中有污染?还是摇菌的时候呢?
6楼2016-08-25 09:44:31
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lxin_yu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by lwk5716 at 2016-08-25 09:44:31
酶切后线状质粒比环状的大倒是有可能,你是说我提取的过程中有污染?还是摇菌的时候呢?...

提质粒的时候菌液的味道正常吗?如果正常的话那就是提的时候污染了,检查下试剂盒
7楼2016-08-25 13:19:43
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by lxin_yu at 2016-08-25 13:19:43
提质粒的时候菌液的味道正常吗?如果正常的话那就是提的时候污染了,检查下试剂盒...

我觉得味道还算正常,不过我是自己配的试剂,溶液一二三,来提的。

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8楼2016-08-25 14:12:00
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by lxin_yu at 2016-08-25 15:30:10
你也可以重新转化一下试试,还有提质粒的时候注意混匀,充分裂解细胞,减少RNA

好的,谢了。

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10楼2016-08-25 19:05:32
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