| 查看: 2006 | 回复: 11 | |||
[交流]
大家看看我这个质粒怎么了 已有5人参与
|
|||
大家帮忙看看我这个质粒怎么了，全式金的T载体，大约4000bp，插入片段100bp左右。左边marker第一条带5000bp，第二条3000bp。菌液已经测序是正确的。提了两次总是在100bp左右有条带，可以确定试剂盒没问题。我想用他做定量PCR，扩增是失败的。 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有126人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 目的片段与表达载体怎么都连接不上
已经有16人回复
- 【征文】一个小硕的三年
已经有68人回复
3楼2016-08-20 15:39:39
aliaaxmu2016
金虫 (职业作家)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 664.5
- 散金: 8450
- 红花: 39
- 沙发: 4
- 帖子: 3224
- 在线: 528.6小时
- 虫号: 4840522
- 注册: 2016-07-14
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-08-21 21:52:51
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-08-21 21:52:51
|
建议如下：1.全程冰上做，减少非特异；2.看看能不能找个平行实验做一下？这样谁也不知道什么玩意。3.pcr污染，换掉所有pcr体系。我感觉非特异可能比较大，之前做人的基因组，这个位置总有明亮非特异 发自小木虫Android客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
leannele4楼2016-08-21 14:59:28
2楼2016-08-20 12:39:47
5楼2016-08-21 22:14:27
6楼2016-08-22 08:02:14
梅太奇阿拉干
木虫 (小有名气)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 2137.8
- 红花: 5
- 帖子: 139
- 在线: 70.1小时
- 虫号: 2566697
- 注册: 2013-07-26
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
你提其他质粒正常吗？是不是裂解时混匀太剧烈了或者裂解时间过长？100bp条带这么亮，不太正常啊。 发自小木虫Android客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
7楼2016-08-24 17:28:47
8楼2016-08-24 20:35:11
梅太奇阿拉干
木虫 (小有名气)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 2137.8
- 红花: 5
- 帖子: 139
- 在线: 70.1小时
- 虫号: 2566697
- 注册: 2013-07-26
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
Rna是非常不稳定的，如果是rna条带周围应该是有一些弥带的，不会是很亮的一条，100bp的片段同浓度下比4000bp片段是暗很多的，你的这个小片段比质粒的条带都亮，说明浓度比质粒还大(正常情况下质粒比rna稳定的多，不可能条带比rna弱)，所以不太正常，而且你也加了RNa酶，所以不太可能是rna,你换一个其他质粒，不含这个重组质粒的菌提一下，看看是不是也这样，如果是，那就可能是你操作或者试剂盒的问题了，如果不是，那就是构建的菌有问题 发自小木虫Android客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
9楼2016-08-25 11:45:36
10楼2016-08-25 15:49:12