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xiaomao225

新虫 (正式写手)

[求助] 蛋白纯化 已有5人参与

做纯化，蛋白不能反复冻容，那我离心收集的菌体能从-20拿出来，放到室温让它溶解吗？

@飞约疯人院 发自小木虫Android客户端
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1楼 2016-08-01 16:20:50
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huaizhenkai

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-08-01 21:46:03
我也刚开始做蛋白纯化了，可以多交流。对的，加裂解buffer混匀后，冰水浴中去破碎裂解就好了。
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好好学习，天天向上！
2楼2016-08-01 18:49:20
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磁珠

新虫 (初入文坛)
你们是用的柱式法吗？

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3楼2016-08-02 19:15:00
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小小细胞啊

新虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-03 07:33:30
我们一般都是菌收了以后分装几管理，一个个纯化，摸了条件以后再全部处理

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4楼2016-08-02 19:37:23
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c269315986

新虫 (初入文坛)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-03 07:33:37
我也是刚开始做蛋白表达纯化，加个好友多多交流~

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5楼2016-08-02 21:03:50
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般我们发酵6L，1L 收集一个管子，冻在-80°，用的时候拿一个，每次纯化一管
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6楼2016-08-03 08:11:45
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
菌体的话没什么问题吧  我们为了裂解更充分还会将菌体加入裂解液后反复冻融几次再超声破碎呢

但是破碎之后离心得到的样品  就不要冻融了  因为蛋白已经释放出来  包括你后面纯化完了得到的纯品也是  不要反复冻融  尽量分装成几分
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7楼2016-08-03 11:07:47
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加裂解BUF放室温溶解，然后在破碎纯化
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8楼2016-08-03 11:20:14
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shouyiyiming

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
原核表达蛋白么？菌体的话，很多人都是先冻融几次再超声的。我通常加完溶菌酶37度裂解半个小时左右就直接冰浴超声了。个人感觉蛋白没有那么容易降解的。能分装最好，但是如果每次需要量少，个人感觉冻融几次也没啥影响。纯化后的蛋白可以加少许甘油存放。反正我纯化后的蛋白用来做ELISA包被抗原，每次只用一点，冻融过好多次，ELISA结果没啥变化，测过浓度也没啥太大变化，没感觉有降解。个人经验，仅供参考。
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9楼2016-08-04 15:57:23
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