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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白纯化
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xiaomao225

新虫 (正式写手)

[求助] 蛋白纯化 已有5人参与

做纯化，蛋白不能反复冻容，那我离心收集的菌体能从-20拿出来，放到室温让它溶解吗？

@飞约疯人院 发自小木虫Android客户端
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1楼 2016-08-01 16:20:50
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shouyiyiming

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
原核表达蛋白么？菌体的话，很多人都是先冻融几次再超声的。我通常加完溶菌酶37度裂解半个小时左右就直接冰浴超声了。个人感觉蛋白没有那么容易降解的。能分装最好，但是如果每次需要量少，个人感觉冻融几次也没啥影响。纯化后的蛋白可以加少许甘油存放。反正我纯化后的蛋白用来做ELISA包被抗原，每次只用一点，冻融过好多次，ELISA结果没啥变化，测过浓度也没啥太大变化，没感觉有降解。个人经验，仅供参考。
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9楼2016-08-04 15:57:23
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huaizhenkai

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-08-01 21:46:03
我也刚开始做蛋白纯化了，可以多交流。对的，加裂解buffer混匀后，冰水浴中去破碎裂解就好了。
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好好学习，天天向上！
2楼2016-08-01 18:49:20
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磁珠

新虫 (初入文坛)
你们是用的柱式法吗？

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3楼2016-08-02 19:15:00
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小小细胞啊

新虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-03 07:33:30
我们一般都是菌收了以后分装几管理，一个个纯化，摸了条件以后再全部处理

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4楼2016-08-02 19:37:23
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