| 查看: 7526 | 回复: 4 | |||
[求助]
纯化蛋白时如何确定洗脱用咪唑的浓度 已有2人参与
|
|
我最近用pET24b表达系统表达一个带有his标签的蛋白（79.5kD）。几次表达纯化（不同条件）后发现，菌的裂解液上清中纯化不到目的蛋白，而沉淀中有大量的目的蛋白。于是我纯化沉淀中的目的蛋白，制备抗体。 纯化时用的Lysis buffer: 50 mM NaH2PO4,300 mM NaCl ,10 mM 咪唑，pH8.0; Washing buffer:50 mM NaH2PO4,300mM NaCl ,40 mM 咪唑，pH8.0; Elution buffer:50 mM NaH2PO4,300 mM NaCl ,250 mM 咪唑，pH8.0; 洗脱液分别取20微升跑SDS-PAGE胶，结果如图所示，我后面再做这个蛋白的纯化时该如何选择洗脱用咪唑的浓度呢？请各位大侠指点！  蛋白纯化.png |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有229人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- [HPLC常见问题]鬼峰、基线漂移、拖尾、分叉峰、保留时间漂移、柱压过高等系列问题
已经有54人回复
- 山东高考化学研究
已经有4人回复
- DNA凝胶回收方法及常见问题
已经有1人回复
- 【资料】分子生物学常见问题解答
已经有30人回复
- 【其他】多肽合成常见问题及参考意见
已经有2人回复
- 【资源】液相色谱常见问题及处理方法
已经有43人回复
hc-material
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +702 - 应助: 517 (博士)
- 金币: 462.9
- 散金: 18028
- 红花: 313
- 帖子: 3594
- 在线: 518.8小时
- 虫号: 4027804
- 注册: 2015-08-18
- 性别: GG
- 专业: 核技术及其应用
- 管辖: 生物科学
2楼2016-07-29 10:05:00
曼陀罗的祈祷
金虫 (正式写手)
- 应助: 39 (小学生)
- 金币: 1282.3
- 散金: 50
- 红花: 7
- 帖子: 494
- 在线: 187.2小时
- 虫号: 2660284
- 注册: 2013-09-13
- 性别: MM
- 专业: 水产学
3楼2016-07-29 15:02:02
4楼2016-08-03 15:13:24
5楼2016-08-04 08:40:48
