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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 纯化蛋白时如何确定洗脱用咪唑的浓度
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yechj

新虫 (初入文坛)

[求助] 纯化蛋白时如何确定洗脱用咪唑的浓度 已有2人参与

我最近用pET24b表达系统表达一个带有his标签的蛋白（79.5kD）。几次表达纯化（不同条件）后发现，菌的裂解液上清中纯化不到目的蛋白，而沉淀中有大量的目的蛋白。于是我纯化沉淀中的目的蛋白，制备抗体。

纯化时用的Lysis  buffer: 50 mM NaH2PO4,300 mM NaCl ,10 mM 咪唑，pH8.0;
Washing buffer:50 mM NaH2PO4,300mM NaCl ,40 mM 咪唑，pH8.0;
Elution buffer:50 mM NaH2PO4,300 mM NaCl ,250 mM 咪唑，pH8.0;

洗脱液分别取20微升跑SDS-PAGE胶，结果如图所示，我后面再做这个蛋白的纯化时该如何选择洗脱用咪唑的浓度呢？请各位大侠指点！

纯化蛋白时如何确定洗脱用咪唑的浓度
蛋白纯化.png
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1楼 2016-07-27 17:10:27
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
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2楼2016-07-29 10:05:00
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)
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想做个有趣的人，却在逗比的道路上越走越远~
3楼2016-07-29 15:02:02
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yechj

新虫 (初入文坛)
内容已删除
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4楼2016-08-03 15:13:24
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

你可以多设置几个咪唑浓度梯度进行洗脱  看看哪个浓度目的蛋白洗下来的最多并且杂蛋白少
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5楼2016-08-04 08:40:48
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