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yechj

新虫 (初入文坛)

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[求助] 纯化蛋白时如何确定洗脱用咪唑的浓度已有2人参与

我最近用pET24b表达系统表达一个带有his标签的蛋白（79.5kD）。几次表达纯化（不同条件）后发现，菌的裂解液上清中纯化不到目的蛋白，而沉淀中有大量的目的蛋白。于是我纯化沉淀中的目的蛋白，制备抗体。

纯化时用的Lysis buffer: 50 mM NaH2PO4,300 mM NaCl ,10 mM 咪唑，pH8.0;
Washing buffer:50 mM NaH2PO4,300mM NaCl ,40 mM 咪唑，pH8.0;
Elution buffer:50 mM NaH2PO4,300 mM NaCl ,250 mM 咪唑，pH8.0;

洗脱液分别取20微升跑SDS-PAGE胶，结果如图所示，我后面再做这个蛋白的纯化时该如何选择洗脱用咪唑的浓度呢？请各位大侠指点！

蛋白纯化.png

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1楼 2016-07-27 17:10:27

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十四_14

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【答案】应助回帖

你可以多设置几个咪唑浓度梯度进行洗脱看看哪个浓度目的蛋白洗下来的最多并且杂蛋白少

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