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yechj

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 8
帖子: 3
在线: 2.5小时
虫号: 2924815
注册: 2014-01-10
性别: MM
专业: 生物物理、生物化学与分子

[求助] 纯化蛋白时如何确定洗脱用咪唑的浓度已有2人参与

我最近用pET24b表达系统表达一个带有his标签的蛋白（79.5kD）。几次表达纯化（不同条件）后发现，菌的裂解液上清中纯化不到目的蛋白，而沉淀中有大量的目的蛋白。于是我纯化沉淀中的目的蛋白，制备抗体。

纯化时用的Lysis buffer: 50 mM NaH2PO4,300 mM NaCl ,10 mM 咪唑，pH8.0;
Washing buffer:50 mM NaH2PO4,300mM NaCl ,40 mM 咪唑，pH8.0;
Elution buffer:50 mM NaH2PO4,300 mM NaCl ,250 mM 咪唑，pH8.0;

洗脱液分别取20微升跑SDS-PAGE胶，结果如图所示，我后面再做这个蛋白的纯化时该如何选择洗脱用咪唑的浓度呢？请各位大侠指点！

蛋白纯化.png

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