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纯化蛋白时如何确定洗脱用咪唑的浓度 已有2人参与
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我最近用pET24b表达系统表达一个带有his标签的蛋白（79.5kD）。几次表达纯化（不同条件）后发现，菌的裂解液上清中纯化不到目的蛋白，而沉淀中有大量的目的蛋白。于是我纯化沉淀中的目的蛋白，制备抗体。 纯化时用的Lysis buffer: 50 mM NaH2PO4,300 mM NaCl ,10 mM 咪唑，pH8.0; Washing buffer:50 mM NaH2PO4,300mM NaCl ,40 mM 咪唑，pH8.0; Elution buffer:50 mM NaH2PO4,300 mM NaCl ,250 mM 咪唑，pH8.0; 洗脱液分别取20微升跑SDS-PAGE胶，结果如图所示，我后面再做这个蛋白的纯化时该如何选择洗脱用咪唑的浓度呢？请各位大侠指点！  蛋白纯化.png |
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