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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 小分子DNA的纯化问题（小于100bp），急！
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皮蛋同学

新虫 (小有名气)

[求助] 小分子DNA的纯化问题（小于100bp），急！ 已有1人参与

本人在做DNA的修饰转化，转化完成后有较多的有机溶剂（包括甘油等），现在需要对DNA进行纯化以进行后续实验，之前试过一个盒子，说明书是适合100-400bp的，回收效率特别低。我的DNA是合成引物，不是基因组的，长度只有50-60bp，公司说最多能合成85bp, 查了一下现在市面上大多是适合基因组DNA纯化的盒子，最少都要100bp。不知道各位大神有什么好的DNA纯化方法。（PAGE什么的就不用啦，对于我的实验来说不太可能用胶回收的方法纯化）
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1楼 2016-07-25 10:30:33
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lxzk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
皮蛋同学: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2016-07-25 15:54:43
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-26 08:47:36
离心柱式分子筛(比如ge的g25或者g50)去掉有机溶剂和盐等小分子，需要浓缩可以再用乙醇沉淀。如果只有甘油或者其它与水互溶的溶剂，也可以考虑用水稀释后加乙酸钠和糖原做乙醇沉淀。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2016-07-25 11:12:44
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lxzk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-26 08:47:47
G25：illustra MicroSpin G-25 Columns，货号27-5325-01
G50：illustra MicroSpin G-50 Columns，货号27-5330-01
我没有试过有机溶剂下做乙醇沉淀，不过加了Glycogen之后乙醇沉淀可以回收非常稀的DNA，几乎没有损失，所以你可以大胆试试稀释到什么程度有机溶剂就不会影响乙醇沉淀了。
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4楼2016-07-25 22:04:37
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lxzk

木虫 (正式写手)
糖原随便加点，一般1微升／20微克，多点少点都没问题。乙酸钠用3M的储液，pH5.2，加1/9体积，也就是终浓度0.3M，如果本来的氯化钠浓度超过0.2M可以不加。乙醇加2.5倍体积(最少2倍体积)，零下20度放一个小时以上，最长过夜也可以。小离心机最高转速(大离心机15000转)离心半小时，可以看到小小的白色沉淀(有一种蓝色的糖原可以看到蓝色沉淀，更好)。去掉上清，加少许70%乙醇，振荡洗涤，再离心5分钟，去掉上清，开盖放置几分钟待乙醇挥发干，加水或者te溶解。其余细节请随便找一本分子克隆或者分子生物学实验教材或者百度之。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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10楼2016-07-28 09:25:26
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皮蛋同学

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxzk at 2016-07-25 11:12:44
离心柱式分子筛(比如ge的g25或者g50)去掉有机溶剂和盐等小分子，需要浓缩可以再用乙醇沉淀。如果只有甘油或者其它与水互溶的溶剂，也可以考虑用水稀释后加乙酸钠和糖原做乙醇沉淀。
...

“离心柱式分子筛(比如ge的g25或者g50)”具体是什么呢？我里面的有机溶剂有甘油和对苯二酚，其他的就是盐了，如果“用水稀释后加乙酸钠和糖原做乙醇沉淀”，回收效率怎么样呢？请大神指教。
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3楼2016-07-25 15:54:29
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NEVER000

木虫 (小有名气)
为啥看不起page呢，切了直接用水溶解

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5楼2016-07-26 21:25:29
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yfd900825

银虫 (正式写手)
糖原加氯化钠加异丙醇解决

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6楼2016-07-26 21:58:41
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皮蛋同学

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by NEVER000 at 2016-07-26 21:25:29
为啥看不起page呢，切了直接用水溶解

不是看不起，如果这样纯化对于我的实验台复杂了，我是做方法学的
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7楼2016-07-28 08:58:45
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皮蛋同学

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yfd900825 at 2016-07-26 21:58:41
糖原加氯化钠加异丙醇解决

有没有具体的配方？用量及时间，没做过提纯，求指教
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8楼2016-07-28 09:00:17
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皮蛋同学

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lxzk at 2016-07-25 22:04:37
G25：illustra MicroSpin G-25 Columns，货号27-5325-01
G50：illustra MicroSpin G-50 Columns，货号27-5330-01
我没有试过有机溶剂下做乙醇沉淀，不过加了Glycogen之后乙醇沉淀可以回收非常稀的DNA，几乎没有损 ...

糖原和乙醇的用量和时间是怎样的呢？没做过纯化，求指导
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9楼2016-07-28 09:05:55
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