应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 小分子DNA的纯化问题（小于100bp），急！
131/2返回列表12下一页
查看: 2884  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

皮蛋同学

新虫 (小有名气)

[求助] 小分子DNA的纯化问题（小于100bp），急！ 已有1人参与

本人在做DNA的修饰转化，转化完成后有较多的有机溶剂（包括甘油等），现在需要对DNA进行纯化以进行后续实验，之前试过一个盒子，说明书是适合100-400bp的，回收效率特别低。我的DNA是合成引物，不是基因组的，长度只有50-60bp，公司说最多能合成85bp, 查了一下现在市面上大多是适合基因组DNA纯化的盒子，最少都要100bp。不知道各位大神有什么好的DNA纯化方法。（PAGE什么的就不用啦，对于我的实验来说不太可能用胶回收的方法纯化）
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2016-07-25 10:30:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lxzk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
皮蛋同学: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2016-07-25 15:54:43
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-26 08:47:36
离心柱式分子筛(比如ge的g25或者g50)去掉有机溶剂和盐等小分子，需要浓缩可以再用乙醇沉淀。如果只有甘油或者其它与水互溶的溶剂，也可以考虑用水稀释后加乙酸钠和糖原做乙醇沉淀。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2016-07-25 11:12:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxzk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-26 08:47:47
G25：illustra MicroSpin G-25 Columns，货号27-5325-01
G50：illustra MicroSpin G-50 Columns，货号27-5330-01
我没有试过有机溶剂下做乙醇沉淀，不过加了Glycogen之后乙醇沉淀可以回收非常稀的DNA，几乎没有损失，所以你可以大胆试试稀释到什么程度有机溶剂就不会影响乙醇沉淀了。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2016-07-25 22:04:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxzk

木虫 (正式写手)
糖原随便加点，一般1微升／20微克，多点少点都没问题。乙酸钠用3M的储液，pH5.2，加1/9体积，也就是终浓度0.3M，如果本来的氯化钠浓度超过0.2M可以不加。乙醇加2.5倍体积(最少2倍体积)，零下20度放一个小时以上，最长过夜也可以。小离心机最高转速(大离心机15000转)离心半小时，可以看到小小的白色沉淀(有一种蓝色的糖原可以看到蓝色沉淀，更好)。去掉上清，加少许70%乙醇，振荡洗涤，再离心5分钟，去掉上清，开盖放置几分钟待乙醇挥发干，加水或者te溶解。其余细节请随便找一本分子克隆或者分子生物学实验教材或者百度之。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2016-07-28 09:25:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

皮蛋同学

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxzk at 2016-07-25 11:12:44
离心柱式分子筛(比如ge的g25或者g50)去掉有机溶剂和盐等小分子，需要浓缩可以再用乙醇沉淀。如果只有甘油或者其它与水互溶的溶剂，也可以考虑用水稀释后加乙酸钠和糖原做乙醇沉淀。
...

“离心柱式分子筛(比如ge的g25或者g50)”具体是什么呢？我里面的有机溶剂有甘油和对苯二酚，其他的就是盐了，如果“用水稀释后加乙酸钠和糖原做乙醇沉淀”，回收效率怎么样呢？请大神指教。
赞一下 回复此楼
3楼2016-07-25 15:54:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

NEVER000

木虫 (小有名气)
为啥看不起page呢，切了直接用水溶解

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2016-07-26 21:25:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yfd900825

银虫 (正式写手)
糖原加氯化钠加异丙醇解决

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-07-26 21:58:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

皮蛋同学

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by NEVER000 at 2016-07-26 21:25:29
为啥看不起page呢，切了直接用水溶解

不是看不起，如果这样纯化对于我的实验台复杂了，我是做方法学的
赞一下 回复此楼
7楼2016-07-28 08:58:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

皮蛋同学

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yfd900825 at 2016-07-26 21:58:41
糖原加氯化钠加异丙醇解决

有没有具体的配方？用量及时间，没做过提纯，求指教
赞一下 回复此楼
8楼2016-07-28 09:00:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

皮蛋同学

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lxzk at 2016-07-25 22:04:37
G25：illustra MicroSpin G-25 Columns，货号27-5325-01
G50：illustra MicroSpin G-50 Columns，货号27-5330-01
我没有试过有机溶剂下做乙醇沉淀，不过加了Glycogen之后乙醇沉淀可以回收非常稀的DNA，几乎没有损 ...

糖原和乙醇的用量和时间是怎样的呢？没做过纯化，求指导
赞一下 回复此楼
9楼2016-07-28 09:05:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 皮蛋同学 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上函评意见出来了，像什么等级？ 20+3 Tsingking1 2026-08-27 14/700 2026-09-01 08:29 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭