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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 求助各位大神帮我一下质粒提取的问题。
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wjqfeixiang

木虫 (小有名气)

[求助] 求助各位大神帮我一下质粒提取的问题。 已有1人参与

我有一个核酸提取的问题请教一下各位大神。
质粒是pCre，就是将Cre重组酶导入。
该质粒是卡那霉素抗性的。在用不去除内毒素的盒子提取十分正常。而同一批质粒用去内毒素的盒子提取总是浓度不高。有时候甚至提不出来。用同样的盒子提取其他质粒，同一批实验做没有任何问题。请问这个是什么原因呢？该质粒拷贝数也属于比较低的那种。请教大神该如何是好？？？谢谢
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1楼 2016-07-18 15:17:39
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博克多

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

怎么都没人回复，我还想看呢，我也刚做，不太懂呢
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没有最好，只有更好
2楼2016-08-18 10:40:17
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allenchem

木虫 (小有名气)
您用的是那款产品？不同的产品的除内毒素原理不同。去除内毒素的时候，损耗质粒的状况也比较常见。抛开操作失误的可能性，那原因就有两个，1.除内毒素的步骤没有做好，而您的质粒还比较少，同样的损耗，在您的实验中体现比较明显。2.除内毒素的步骤与你的质粒不兼容。这种情况会出现在，你的质粒比较大，并且使用阴离子交换原理除内毒素的盒子时。

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3楼2016-08-19 13:17:39
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werq63

金虫 (著名写手)
普通方法提取质粒，用ETR blue再去内毒素，能回收80%，或者用曲拉通x114

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4楼2016-08-19 14:31:00
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wjqfeixiang

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by werq63 at 2016-08-19 14:31:00
普通方法提取质粒，用ETR blue再去内毒素，能回收80%，或者用曲拉通x114

用的是omega的试剂盒，ETR Blue 去除内毒素。
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5楼2016-09-09 10:25:05
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wjqfeixiang

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by allenchem at 2016-08-19 13:17:39
您用的是那款产品？不同的产品的除内毒素原理不同。去除内毒素的时候，损耗质粒的状况也比较常见。抛开操作失误的可能性，那原因就有两个，1.除内毒素的步骤没有做好，而您的质粒还比较少，同样的损耗，在您的实验中 ...

用的是omega的试剂盒。endo-free plasmid DNA midi kit。D6915-01. 除内毒素是用的ETR blue。同样一个实验做过阳性对照。实验技术应该没出现出入。
ETRblue会和质粒不兼容吗？我的这个质粒是是以shuttle为骨架的，启动子是CMV，确实不知道会有什么不兼容的情况。shuttle算是比较常用的骨架。
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6楼2016-09-09 10:39:15
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weiyanpu10

新虫 (初入文坛)
请问这个问题，您解决了么？我也遇到同样问题，请教你，谢谢

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7楼2019-03-29 20:27:57
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