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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » DNA Walking出现滑稽的结果
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朱庆平

铜虫 (小有名气)

[交流] DNA Walking出现滑稽的结果

最近在做植物的DNA Walking，以期找出目的基因的5‘端。第一次做，P出了一个600bp左右的片段，经过测序比对，确定结果是正确的。但是由于我这个基因比较长，我觉得600bp的长度是不够的，然后就又根据这600bp的序列来设计出三个引物来继续Walking，这时候出现了2kb和1kb和单一的条带，欣喜之余送去测序。拿到测序结果后，却令人失望，与我原先已有的序列对不上无法拼接；后来我自己慢慢捣鼓，居然发现了一个很滑稽的结果：原来我的基因特异性引物GSP居然充当了扩增出片段的上下游引物，一个引物居然起到了两种引物的作用，而走Walking所用的随机引物并没有出现在所扩增出来的片段中。
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1楼2016-06-29 11:01:18
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poppinzyoung

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
您好，你设计的引物如何设计的，是在已知序列设计上下游引物吗？
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25楼2019-02-25 08:34:10
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luoruf

新虫 (著名写手)
★
朱庆平(金币+1): 谢谢参与
祝福楼主祝福多多
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4楼2016-06-29 12:16:01
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xuzhaof

新虫 (著名写手)
★
朱庆平(金币+1): 谢谢参与
想什么有什么 加油
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8楼2016-06-29 12:27:41
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xiaohuank

银虫 (著名写手)
★
朱庆平(金币+1): 谢谢参与
美好的祝福送给你
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10楼2016-06-29 12:28:42
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