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DNA Walking出现滑稽的结果
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| 最近在做植物的DNA Walking，以期找出目的基因的5‘端。第一次做，P出了一个600bp左右的片段，经过测序比对，确定结果是正确的。但是由于我这个基因比较长，我觉得600bp的长度是不够的，然后就又根据这600bp的序列来设计出三个引物来继续Walking，这时候出现了2kb和1kb和单一的条带，欣喜之余送去测序。拿到测序结果后，却令人失望，与我原先已有的序列对不上无法拼接；后来我自己慢慢捣鼓，居然发现了一个很滑稽的结果：原来我的基因特异性引物GSP居然充当了扩增出片段的上下游引物，一个引物居然起到了两种引物的作用，而走Walking所用的随机引物并没有出现在所扩增出来的片段中。 |
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