| 查看: 4991 | 回复: 27 | |||
[求助]
急，镍柱纯化蛋白，很低浓度的咪唑就冲下来了，有杂带。怎么办？ 已有9人参与
|
|||
|
最近一直在纯化蛋白，用的镍柱纯化。平衡，洗杂缓冲液A 是用的50mM的乙酸钠缓冲液，500mM氯化钠，20mM咪唑 洗脱缓冲液B 用的是50mM的乙酸钠缓冲液，500mM氯化钠，500mM咪唑 之前洗脱是用的线性洗脱，但是一直有杂带。 这次先用的低浓度咪唑洗，再用的高浓度的咪唑洗，发现5%的 B洗脱缓冲液就可以洗下来，结合能力太弱。请问大神们，问题出在哪里，要怎么样做才可以纯出比较单一的目的蛋白（只想用镍柱），谢谢了    @hc-material @gyesang 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一本书
已经有12人回复
-
基金申报
已经有4人回复
-
计算机、0854电子信息（085401-058412）调剂
已经有4人回复
-
国自然申请面上模板最新2026版出了吗？
已经有9人回复
-
溴的反应液脱色
已经有6人回复
-
纳米粒子粒径的测量
已经有7人回复
-
常年博士招收(双一流，工科)
已经有4人回复
-
参与限项
已经有5人回复
-
有没有人能给点建议
已经有5人回复
-
假如你的研究生提出不合理要求
已经有12人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 蛋白包涵体纯化后，复性缓冲液用什么呢？急急急
已经有5人回复
- 酶活测定问题请教
已经有9人回复
- 蛋白纯化
已经有6人回复
|
上样和洗脱pH很重要 你目前的洗脱体系15%就可以把你的目的蛋白洗出来 设置0～15%B 洗脱时间长一点 看看能不能分出来 如果还是不纯的话 更换下缓冲液pH 其实纯化就那么几个条件 你就反复摸索。会找到合适的条件的 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-06-28 15:47:16
xu5606587
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 155.6
- 帖子: 53
- 在线: 63.2小时
- 虫号: 1331405
- 注册: 2011-06-26
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
15楼2016-07-04 16:13:20
walking dead
金虫 (小有名气)
填料制备和蛋白纯化专家
- 应助: 40 (小学生)
- 贵宾: 0.001
- 金币: 1354.8
- 散金: 59
- 红花: 17
- 帖子: 287
- 在线: 56.5小时
- 虫号: 4175016
- 注册: 2015-10-26
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
24楼2016-08-15 14:53:51
2楼2016-06-26 22:49:18
hc-material
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +702 - BioEPI: 1
- 应助: 517 (博士)
- 金币: 462.9
- 散金: 18028
- 红花: 313
- 帖子: 3594
- 在线: 518.8小时
- 虫号: 4027804
- 注册: 2015-08-18
- 性别: GG
- 专业: 核技术及其应用
- 管辖: 生物科学
3楼2016-06-27 11:04:50
|
本帖内容被屏蔽 |
5楼2016-06-29 14:36:43
6楼2016-06-29 20:17:09
7楼2016-06-29 20:17:59
8楼2016-06-29 20:18:14
9楼2016-06-29 21:07:24
chlorella409
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 88 (初中生)
- 金币: 3245.6
- 散金: 1000
- 红花: 4
- 帖子: 376
- 在线: 182.4小时
- 虫号: 1600249
- 注册: 2012-02-05
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
10楼2016-06-30 09:55:43