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急，镍柱纯化蛋白，很低浓度的咪唑就冲下来了，有杂带。怎么办？ 已有9人参与
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最近一直在纯化蛋白，用的镍柱纯化。平衡，洗杂缓冲液A 是用的50mM的乙酸钠缓冲液，500mM氯化钠，20mM咪唑 洗脱缓冲液B 用的是50mM的乙酸钠缓冲液，500mM氯化钠，500mM咪唑 之前洗脱是用的线性洗脱，但是一直有杂带。 这次先用的低浓度咪唑洗，再用的高浓度的咪唑洗，发现5%的 B洗脱缓冲液就可以洗下来，结合能力太弱。请问大神们，问题出在哪里，要怎么样做才可以纯出比较单一的目的蛋白（只想用镍柱），谢谢了    @hc-material @gyesang 发自小木虫Android客户端 |
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9楼2016-06-29 21:07:24
2楼2016-06-26 22:49:18
hc-material
专家顾问 (职业作家)
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- 性别: GG
- 专业: 核技术及其应用
- 管辖: 生物科学
3楼2016-06-27 11:04:50
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上样和洗脱pH很重要 你目前的洗脱体系15%就可以把你的目的蛋白洗出来 设置0～15%B 洗脱时间长一点 看看能不能分出来 如果还是不纯的话 更换下缓冲液pH 其实纯化就那么几个条件 你就反复摸索。会找到合适的条件的 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-06-28 15:47:16