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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 蛋白电泳时，样品中SDS浓度过高，如何降低？
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)

[求助] 蛋白电泳时，样品中SDS浓度过高，如何降低？ 已有2人参与

本人在SDS-PAGE实验中遇到一个问题，请教大神：

我的蛋白样品是用5%的SDS将固体材料表面吸附的蛋白洗脱下来得到的，浓度并不高，大概只有不到40ug/mL，利用12%的胶跑了SDS-PAGE，条带非常不明显，几乎看不到；
我为了可以看到条带，将样品利用超滤管进行了浓缩，大概浓缩了5倍，浓缩后的样品同样条件下进行SDS_PAGE，电泳过程中就非常奇怪，如图，这个跟我样品中SDS浓度太高有关吗？？因为猜测是因为浓缩的过程中SDS也跟着浓缩了；另外，脱色后的蛋白条带依旧非常浅，也就是说我的蛋白几乎没有得到浓缩，
所以想请教：怎样降低SDS浓度又不损失我的蛋白，并且还能得到明显的条带图？如果只是单纯稀释的话更看不到我的蛋白条带了……

蛋白电泳时，样品中SDS浓度过高，如何降低？
IMG_20160617_152532.jpg
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1楼 2016-06-17 23:39:35
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)
补充一下  我的蛋白是纤维蛋白原

还请各位大神指教啊！！！
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2楼2016-06-18 23:28:11
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zy_1215

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
十四_14: 金币+20, 胶没有问题 因为marker和标准品跑得都没问题的 2016-07-12 22:43:25
我觉得你的样品都弥散了 是不是你的凝胶配制也有问题？是不是没有混匀。
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3楼2016-07-12 19:36:14
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waterzjf

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

一般是电泳蛋白胶的问题，你重新按配方配一块吧，试剂最好用新的，特别是APS 和丙烯酰胺。
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4楼2016-08-29 09:06:59
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