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十四_14

荣誉版主 (正式写手)

[求助] 蛋白电泳时,样品中SDS浓度过高,如何降低? 已有2人参与

本人在SDS-PAGE实验中遇到一个问题,请教大神:

我的蛋白样品是用5%的SDS将固体材料表面吸附的蛋白洗脱下来得到的,浓度并不高,大概只有不到40ug/mL,利用12%的胶跑了SDS-PAGE,条带非常不明显,几乎看不到;
我为了可以看到条带,将样品利用超滤管进行了浓缩,大概浓缩了5倍,浓缩后的样品同样条件下进行SDS_PAGE,电泳过程中就非常奇怪,如图,这个跟我样品中SDS浓度太高有关吗??因为猜测是因为浓缩的过程中SDS也跟着浓缩了;另外,脱色后的蛋白条带依旧非常浅,也就是说我的蛋白几乎没有得到浓缩,
所以想请教:怎样降低SDS浓度又不损失我的蛋白,并且还能得到明显的条带图?如果只是单纯稀释的话更看不到我的蛋白条带了……

蛋白电泳时,样品中SDS浓度过高,如何降低?
IMG_20160617_152532.jpg
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)

补充一下  我的蛋白是纤维蛋白原

还请各位大神指教啊!!!
2楼2016-06-18 23:28:11
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zy_1215

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
十四_14: 金币+20, 胶没有问题 因为marker和标准品跑得都没问题的 2016-07-12 22:43:25
我觉得你的样品都弥散了 是不是你的凝胶配制也有问题?是不是没有混匀。
3楼2016-07-12 19:36:14
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waterzjf

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

一般是电泳蛋白胶的问题,你重新按配方配一块吧,试剂最好用新的,特别是APS 和丙烯酰胺。
4楼2016-08-29 09:06:59
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