| 查看: 1245 | 回复: 4 | ||
yujifeierhwf新虫 (初入文坛)
|
[求助]
T-克隆构建质粒不成功 已有4人参与
|
|
求助给位大神 PCR扩增目的产物条带单一，回收后进行克隆连接，平板蓝白斑长的正常，但挑白斑进行菌液PCR验证时只有二聚体 验证用的引物是T7/SP6的质粒通用引物。 用T-克隆试剂盒中的核酸进行克隆连接，并检测白菌落，有目的产物是对的。就是说感受态细胞和载体是正常的，根据这个结果重新获取PCR产物，但结果仍然是菌落正常，菌液验证就是没有条带，连空载的片段都没有 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有86人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 菌液测序常见的问题
已经有2人回复
- 转染实验要注意的一些问题
已经有8人回复
- 翻译过的请润色，没有翻译的请翻译为英文
已经有2人回复
- 基因克隆PCR检测不出阳性克隆
已经有1人回复
- 【专题】基因克隆知识问答及FAQ
已经有0人回复
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。myprayer祝您科研顺利，文章多多。 2016-06-07 23:18:10
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。myprayer祝您科研顺利，文章多多。 2016-06-07 23:18:10
| 前几天看到一个关于PCR实验资料问答的网站，http://www.ebioq.com/openlab/12/0，推荐你看看，我们实验室当时做不好就在这做了，还蛮好，你看看。 |
2楼2016-06-07 16:38:48
3楼2016-06-07 17:19:16
原海亮
木虫 (著名写手)
- 应助: 232 (大学生)
- 金币: 4607.4
- 散金: 3521
- 红花: 33
- 帖子: 1804
- 在线: 375.4小时
- 虫号: 1392705
- 注册: 2011-09-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。myprayer祝您科研顺利，文章多多。 2016-06-07 23:18:31
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。myprayer祝您科研顺利，文章多多。 2016-06-07 23:18:31
|
可以从以下几方面找原因，第一，确认一下使用的聚合酶是否具有末端加A的功能，如果没有，你需要对pcr产物进行加A。第二，回收的pcr产物最好进行电泳检测，确保片段回收成功，并且可以根据其浓度调整连接体系。第三，挑取克隆进行pcr的时候，可以找个已经构建成功的质粒作为阳性对照，确保pcr体系没有问题，同时可以用片段特异性引物来辅助验证。最后，可以不进行菌液pcr或者不管菌液pcr结果如何，对挑取的克隆提质粒，对质粒进行酶切和pcr验证，这应该是最可靠的方法，因为经常会出现菌液pcr没有结果，但是酶切验证是正确的现象，所以个人觉得酶切验证及测序分析应该是判断克隆是否构建成功的依据，菌液pcr只是初筛，容易出现误差。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-06-07 17:43:40
5楼2016-06-07 17:44:10
100