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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 用了三种菌还是表达不出蛋白
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海
引用回帖:
17楼: Originally posted by wj2423311236 at 2016-06-01 16:10:59
实在不行换个质粒

准备试试32a
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21楼2016-06-01 18:09:31
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jiuzi59

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 上官abc at 2016-06-01 15:49:25
来自于碧桃...

你的基因是反转录的得到的，蛋白没有表达，看来与密码子的使用效率有关，你做过密码子的使用效率的吗？这个
是密码子使用的效率网址，你对照一下。http://www.faculty.ucr.edu/~mmad ... e.htm#opennewwindow
再不行的话，直接拿你现在的基因重新合成做一下密码子优化。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

上官abc
22楼2016-06-01 18:11:18
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wj2423311236

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
上官abc: 金币+5 2016-06-01 19:20:07
引用回帖:
20楼: Originally posted by 上官abc at 2016-06-01 17:58:22
要是基因的问题，那岂不是非常麻烦？...

真核生物基因做原核表达本来就不太好做，劝你查查有没有信号肽，有的话最好切掉，顺便问一下，碧桃是植物吗？

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23楼2016-06-01 18:26:04
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海
引用回帖:
18楼: Originally posted by 030Selma at 2016-06-01 16:22:20
我也在做表达，一般诱导条件如温度与IPTG浓度对有无表达不会有太大的影响，只是会一定程度上影响表达量。如果确认目的片段链接载体正确，不会提前终止，没有移码突变等，这个载体表达不出来，果断换一个，你都尝试了 ...

换哪一种载体，有没有什么原则？
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24楼2016-06-01 19:03:31
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海
引用回帖:
19楼: Originally posted by radom at 2016-06-01 16:34:56
你做可溶表达吗，如果是包涵体，可以试试自动诱导

蛋白质表达不出来，可以先考虑这些吗？不是很懂，望赐教！
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25楼2016-06-01 19:18:16
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海
引用回帖:
23楼: Originally posted by wj2423311236 at 2016-06-01 18:26:04
真核生物基因做原核表达本来就不太好做，劝你查查有没有信号肽，有的话最好切掉，顺便问一下，碧桃是植物吗？
...

对，是的
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26楼2016-06-01 19:19:32
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卢珂宇

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Liumengya at 2016-05-31 22:37:20
没试试rostaa（拼写不是很对）

trasnetta就是roseeta

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27楼2016-06-01 19:30:12
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海
引用回帖:
22楼: Originally posted by jiuzi59 at 2016-06-01 18:11:18
你的基因是反转录的得到的，蛋白没有表达，看来与密码子的使用效率有关，你做过密码子的使用效率的吗？这个
是密码子使用的效率网址，你对照一下。http://www.faculty.ucr.edu/~mmaduro/codonusage/usage.htm#ope ...

谢谢，我先试试32a和28a载体吧，正好实验室有这两种。密码子优化对我来说还很陌生，实在不行 再尝试这个。非常感谢！
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28楼2016-06-01 20:08:42
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海
送红花一朵
引用回帖:
22楼: Originally posted by jiuzi59 at 2016-06-01 18:11:18
你的基因是反转录的得到的，蛋白没有表达，看来与密码子的使用效率有关，你做过密码子的使用效率的吗？这个
是密码子使用的效率网址，你对照一下。http://www.faculty.ucr.edu/~mmaduro/codonusage/usage.htm#ope ...

忘了给朵小红花
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29楼2016-06-01 20:09:16
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wj2423311236

银虫 (小有名气)
引用回帖:
21楼: Originally posted by 上官abc at 2016-06-01 18:09:31
准备试试32a...

你们实验室有pet32a吗？我可不可以用pet28a跟你换

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30楼2016-06-01 20:15:50
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