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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 用了三种菌还是表达不出蛋白
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030Selma

金虫 (正式写手)
引用回帖:
24楼: Originally posted by 上官abc at 2016-06-01 19:03:31
换哪一种载体，有没有什么原则？...

我觉得没什么原则，就试试试，看运气~

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31楼2016-06-02 00:25:59
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ttszero

新虫 (小有名气)
原核表达不难，我用的是pet32a的载体，不清楚pet30的，注意下插入序列是否有移码，有些酶切位点在设计上就是移码的，要补碱基，注意下酶切位点有没有把载体上rbs序列切掉，没了这段除非高表达的，一般也不会出条带

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32楼2016-06-02 07:21:26
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匿名

用户注销 (著名写手)
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33楼2016-06-02 07:32:39
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gnice

金虫 (正式写手)
全细胞破碎跑电泳看看

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34楼2016-06-02 07:50:48
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想学好的学渣

铁杆木虫 (正式写手)
分析过密码子偏好性没有，稀有密码子是不是存在连续多个？

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35楼2016-06-02 08:11:42
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xl0071334

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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引用回帖:
5楼: Originally posted by 上官abc at 2016-06-01 10:35:44
S:    GGGGTACCATGGAGTTTTTGGGTCTCGGCGAT
AS:  CGGGATCCTGCTACCACGAAAGCACTAGATG
酶切位点分别为Kpn1 和BamH 1。
这个是部分全长，中间就用~~代替了。ATGGAGTTTTTGGGTCTCGGCGATAACAAGGTTCGGAGAACTTATGGAGCTTTGT ...

你不是用ndei和bamhi嘛，怎么上引物有kpni，ncoi，却没有ndeI

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36楼2016-06-02 08:13:08
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匿名

用户注销 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
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37楼2016-06-02 09:54:04
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super_mm

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你表达的蛋白带不带标签，带标签可以用上清纯化试试看，有时候表达量低的话全菌电泳不一定能看出表达
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38楼2016-06-02 15:04:04
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久久and玖玖

新虫 (初入文坛)
是不是都表达在沉淀里了？

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39楼2016-06-02 16:07:14
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vjebejw570
祝福
40楼2016-06-02 16:32:33
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