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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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star013

新虫 (知名作家)


我们可以帮您做蛋白表达技术服务

发自小木虫Android客户端
11楼2016-06-01 12:29:42
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jiuzi59

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 上官abc at 2016-06-01 10:35:44
S:    GGGGTACCATGGAGTTTTTGGGTCTCGGCGAT
AS:  CGGGATCCTGCTACCACGAAAGCACTAGATG
酶切位点分别为Kpn1 和BamH 1。
这个是部分全长,中间就用~~代替了。ATGGAGTTTTTGGGTCTCGGCGATAACAAGGTTCGGAGAACTTATGGAGCTTTGT ...

不是Kpn 1和Nde 吗?要是这个就是表达方向错了,而Kpn1 和BamH 1引物没有问题。你这基因是哪里的基因,做过优化吗?
12楼2016-06-01 12:41:29
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海

引用回帖:
12楼: Originally posted by jiuzi59 at 2016-06-01 12:41:29
不是Kpn 1和Nde 吗?要是这个就是表达方向错了,而Kpn1 和BamH 1引物没有问题。你这基因是哪里的基因,做过优化吗?...

是BamH 1,不是Nde 1,之前是我搞错了。这个是我自己测得的全长,基因优化是什么?
13楼2016-06-01 14:34:36
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jiuzi59

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 上官abc at 2016-06-01 14:34:36
是BamH 1,不是Nde 1,之前是我搞错了。这个是我自己测得的全长,基因优化是什么?...

你的基因来源于哪里,不同物种之间的基因在大肠中表达的话,需要做密码子优化。
14楼2016-06-01 14:44:56
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海

引用回帖:
14楼: Originally posted by jiuzi59 at 2016-06-01 14:44:56
你的基因来源于哪里,不同物种之间的基因在大肠中表达的话,需要做密码子优化。...

来自于碧桃
15楼2016-06-01 15:49:25
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wj2423311236

银虫 (小有名气)

建议你查查同类基因文献,看看基因本身是否有问题,我最近的基因也没有表达出来,现在在差文献,初步怀疑是信号肽的问题

发自小木虫Android客户端
16楼2016-06-01 16:10:36
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wj2423311236

银虫 (小有名气)

17楼2016-06-01 16:10:59
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030Selma

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
上官abc: 金币+5 2016-06-01 17:54:46
我也在做表达,一般诱导条件如温度与IPTG浓度对有无表达不会有太大的影响,只是会一定程度上影响表达量。如果确认目的片段链接载体正确,不会提前终止,没有移码突变等,这个载体表达不出来,果断换一个,你都尝试了三个菌种了,建议换载体再试

发自小木虫IOS客户端
18楼2016-06-01 16:22:20
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radom

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你做可溶表达吗,如果是包涵体,可以试试自动诱导
19楼2016-06-01 16:34:56
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海

引用回帖:
16楼: Originally posted by wj2423311236 at 2016-06-01 16:10:36
建议你查查同类基因文献,看看基因本身是否有问题,我最近的基因也没有表达出来,现在在差文献,初步怀疑是信号肽的问题

要是基因的问题,那岂不是非常麻烦?
20楼2016-06-01 17:58:22
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