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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 用了三种菌还是表达不出蛋白
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star013

新虫 (知名作家)
我们可以帮您做蛋白表达技术服务

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11楼2016-06-01 12:29:42
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jiuzi59

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 上官abc at 2016-06-01 10:35:44
S:    GGGGTACCATGGAGTTTTTGGGTCTCGGCGAT
AS:  CGGGATCCTGCTACCACGAAAGCACTAGATG
酶切位点分别为Kpn1 和BamH 1。
这个是部分全长，中间就用~~代替了。ATGGAGTTTTTGGGTCTCGGCGATAACAAGGTTCGGAGAACTTATGGAGCTTTGT ...

不是Kpn 1和Nde 吗？要是这个就是表达方向错了，而Kpn1 和BamH 1引物没有问题。你这基因是哪里的基因，做过优化吗？
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12楼2016-06-01 12:41:29
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海
引用回帖:
12楼: Originally posted by jiuzi59 at 2016-06-01 12:41:29
不是Kpn 1和Nde 吗？要是这个就是表达方向错了，而Kpn1 和BamH 1引物没有问题。你这基因是哪里的基因，做过优化吗？...

是BamH 1,不是Nde 1，之前是我搞错了。这个是我自己测得的全长，基因优化是什么？
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13楼2016-06-01 14:34:36
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jiuzi59

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 上官abc at 2016-06-01 14:34:36
是BamH 1,不是Nde 1，之前是我搞错了。这个是我自己测得的全长，基因优化是什么？...

你的基因来源于哪里，不同物种之间的基因在大肠中表达的话，需要做密码子优化。
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14楼2016-06-01 14:44:56
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海
引用回帖:
14楼: Originally posted by jiuzi59 at 2016-06-01 14:44:56
你的基因来源于哪里，不同物种之间的基因在大肠中表达的话，需要做密码子优化。...

来自于碧桃
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15楼2016-06-01 15:49:25
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wj2423311236

银虫 (小有名气)
建议你查查同类基因文献，看看基因本身是否有问题，我最近的基因也没有表达出来，现在在差文献，初步怀疑是信号肽的问题

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16楼2016-06-01 16:10:36
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wj2423311236

银虫 (小有名气)
实在不行换个质粒

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17楼2016-06-01 16:10:59
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030Selma

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
上官abc: 金币+5 2016-06-01 17:54:46
我也在做表达，一般诱导条件如温度与IPTG浓度对有无表达不会有太大的影响，只是会一定程度上影响表达量。如果确认目的片段链接载体正确，不会提前终止，没有移码突变等，这个载体表达不出来，果断换一个，你都尝试了三个菌种了，建议换载体再试

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18楼2016-06-01 16:22:20
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radom

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你做可溶表达吗，如果是包涵体，可以试试自动诱导
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19楼2016-06-01 16:34:56
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海
引用回帖:
16楼: Originally posted by wj2423311236 at 2016-06-01 16:10:36
建议你查查同类基因文献，看看基因本身是否有问题，我最近的基因也没有表达出来，现在在差文献，初步怀疑是信号肽的问题

要是基因的问题，那岂不是非常麻烦？
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20楼2016-06-01 17:58:22
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