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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 用了三种菌还是表达不出蛋白
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
楼主，求赠送pET30载体，跪谢！

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51楼2016-06-05 22:16:11
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
50楼: Originally posted by CarolChan at 2016-06-05 20:46:43
我和楼主遇到了一样的问题，一个936bp也就是35kD左右的片段，不管是和pET28a还是pMAL-C2X载体连接，宿主菌也换过BL21(DE3)、TB1和Transetta，怎样都是不表达。也做过诱导条件优化，改变诱导时间、温度和IPTG浓度，但 ...

求赠送载体！跪谢

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52楼2016-06-05 22:17:03
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prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
50楼: Originally posted by CarolChan at 2016-06-05 20:46:43
我和楼主遇到了一样的问题，一个936bp也就是35kD左右的片段，不管是和pET28a还是pMAL-C2X载体连接，宿主菌也换过BL21(DE3)、TB1和Transetta，怎样都是不表达。也做过诱导条件优化，改变诱导时间、温度和IPTG浓度，但 ...

你好，我想请问一下，你们实验室还有pMAL-C2x载体吗？我能不能借一点呢。
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nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
53楼2016-06-08 11:16:03
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CarolChan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
53楼: Originally posted by prthefu at 2016-06-08 11:16:03
你好，我想请问一下，你们实验室还有pMAL-C2x载体吗？我能不能借一点呢。...

我现在用的这个C2X载体是我从其他人构建好的重组质粒上切下来的，完整的C2X载体我这也没有了，抱歉
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54楼2016-06-08 11:33:29
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prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
54楼: Originally posted by CarolChan at 2016-06-08 11:33:29
我现在用的这个C2X载体是我从其他人构建好的重组质粒上切下来的，完整的C2X载体我这也没有了，抱歉...

那仅仅是MBL载体呢，你们还有吗

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nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
55楼2016-06-09 09:15:51
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CarolChan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
55楼: Originally posted by prthefu at 2016-06-09 09:15:51
那仅仅是MBL载体呢，你们还有吗
...

C2X全称就是pMAL-C2X，两个是同一个东西，我现在用的这个载体，最近测序结果显示也有点问题，我也想要换个好的，但问了好多地方都找不着，买的话又太贵。。。
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56楼2016-06-13 13:48:09
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prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
56楼: Originally posted by CarolChan at 2016-06-13 13:48:09
C2X全称就是pMAL-C2X，两个是同一个东西，我现在用的这个载体，最近测序结果显示也有点问题，我也想要换个好的，但问了好多地方都找不着，买的话又太贵。。。...

这个载体用着不好吗？是也有出现什么问题吗？我之前查着，用MBL这个分子伴侣能增加蛋白可溶性，所以，我还想换这个载体呢。
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nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
57楼2016-06-13 14:38:50
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CarolChan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
57楼: Originally posted by prthefu at 2016-06-13 14:38:50
这个载体用着不好吗？是也有出现什么问题吗？我之前查着，用MBL这个分子伴侣能增加蛋白可溶性，所以，我还想换这个载体呢。...

载体是好的，我有师兄师姐是用这个载体构建了重组菌，表达量也挺好。但是可能是因为保存久了还是怎么的，一些碱基突变了，所以在我手里虽然构建好了但一直没法表达
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58楼2016-06-13 16:48:02
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希希xixi

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
47楼: Originally posted by tmoonday at 2016-06-04 20:11:04
一个，查一下是否是膜蛋白，是否有夸膜区。第二是，建议用pGEX系列载体试一下，GST标签促融。

请问一下，我的蛋白是跨膜蛋白，也一直诱导不出来。是跨膜蛋白应该用pGEX载体吗？
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59楼2016-07-12 16:04:55
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