| 查看: 2550 | 回复: 16 | ||
[求助]
质粒切不开 已有4人参与
|
||
|
内切酶用的XbaI，位于我的目的基因两边，测序结果表明酶切位点序列正确，两边也没有甲基化位点，想用XbaI进行酶切，但调整质粒浓度，酶量，反应体系，酶切时间，更换新的内切酶，始终切不开，求教各位高手 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有144人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有6人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
原海亮
木虫 (著名写手)
- 应助: 232 (大学生)
- 金币: 4607.4
- 散金: 3521
- 红花: 33
- 帖子: 1804
- 在线: 375.4小时
- 虫号: 1392705
- 注册: 2011-09-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
你的基因是连在质粒载体上对吧，这两个xbai位点是质粒上的？还是你插入的目的基因上的？所谓的切开，是电泳显示把你目的基因切下来？不清楚你进行酶切的目的是做什么，如果是酶切验证克隆，可以更换其他酶来处理，只要能切出正确大小即可。如果是为了回收目的片段进行亚克隆，我不清楚为什么选择单酶切，当然实在切不下来，你可以通过pcr扩增来获得目的片段。对于你说的切不开，我猜测的原因:测序显示酶切位点正确，其实这个不应该是在你测序前就已经构建好正确的图谱了么，除非你的目的基因是未知序列，然后测序结果来和你的理论序列对比看是否正确，而且测序结果最好有平行的，一个测序结果通常说服力太小。另一个就是要你确定这个酶切位点是否被甲基化，，毕竟xbai还是非常容易被甲基化或者其他修饰的，可以参考这个酶的说明书，尽量在甲基化缺陷的感受态进行克隆，祝好！ 发自小木虫Android客户端 |
7楼2016-05-31 07:35:21
tfytli
金虫 (职业作家)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 1464.7
- 散金: 5503
- 红花: 60
- 沙发: 18
- 帖子: 4454
- 在线: 544.6小时
- 虫号: 2604524
- 注册: 2013-08-19
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
2楼2016-05-29 23:07:32
3楼2016-05-30 07:52:44
tfytli
金虫 (职业作家)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 1464.7
- 散金: 5503
- 红花: 60
- 沙发: 18
- 帖子: 4454
- 在线: 544.6小时
- 虫号: 2604524
- 注册: 2013-08-19
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
4楼2016-05-30 09:15:54
lx910615
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1074.9
- 散金: 12
- 红花: 1
- 帖子: 245
- 在线: 22.1小时
- 虫号: 3602667
- 注册: 2014-12-19
- 专业: 生物化学
5楼2016-05-31 07:17:23
lx910615
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1074.9
- 散金: 12
- 红花: 1
- 帖子: 245
- 在线: 22.1小时
- 虫号: 3602667
- 注册: 2014-12-19
- 专业: 生物化学
6楼2016-05-31 07:17:57
8楼2016-05-31 07:58:00
9楼2016-05-31 08:45:38
tfytli
金虫 (职业作家)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 1464.7
- 散金: 5503
- 红花: 60
- 沙发: 18
- 帖子: 4454
- 在线: 544.6小时
- 虫号: 2604524
- 注册: 2013-08-19
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
10楼2016-05-31 09:11:29
